cytométrie en flux© Flashcards
Comment se fixe l’iodure de propidium sur l’ADN nucléaire ?
-D’abord il il pénètre uniquement dans les cellules dont les membranes sont perméabilisées
- Se fixe de façon irréversible sur l’ADN nucléaire !!
Comment fait on le marquage de l’ADN ?
Marquage de l’ADN par le iodure de propidium (fluorochrome agent intercalant? HYDROPHILE)
après perméabilisation de la membrane plasmique excitation 488nm émission
dans le rouge (610 nm)
Comment est la quantité d’ADN selon la quantité de fluorescence ?
Le taux de fixation du PI est directement lié à la quantité d’ADN et émettra une
quantité de fluorescence qui sera proportionnelle à la quantité d’ADN présente :
- Plus la cellule est riche en ADN (phase G2) plus elle fluoresce : G1<S<G2/M
- Le signal est enregistré et peut être représente par un graphe montrant le
nombre de cellules en fonction de la quantité d’ADN
Quelles sont les principales applications à la cytométrie en flux ?
- étude sur l’effet des drogues sur le cycle cell
-cancérologie ( déterminer vitesse de prolifération)
Comment est la durée de la phase G1 pour les cellules cancéreuses ?
Elle est raccourcie ( normalement c’est 24h)
en cyrtométrie le nombre de cellules en phase S/G2 est le reflet de quoi ?
le reflet de la prolifération
Pour une culture asynchrone, le nombre de cellules et comment par rapport à la durée de cette phase ?
le nombre de cellules dans une phase
est proportionnel à la durée de cette phase : utilisation de facteurs de croissance,
etc…
Que se passe t-il avec l’ADN des cellules mortes ?
Les cellules mortes voient leur ADN se dégrader
La quantité d’ADN devient donc inférieure à 2n chromosome lorsqu’elles meurent
Quelles sont les applications techniques ?
- Sn38 : métabolite actif d’une chimiothérapie (but= tuer cell par apoptose)
- Cellules normales (témoin) : cellules non
traitées - Cellules en division : G1 (pic 2N) -S-G2 (pic
4N) - Cellules traitées au sn38 :
- Les cellules sont tuées et elles ont une
quantité d’ADN anormale et inférieure à 2n
chromosome : ADN dégradé - Certaines cellules ont un blocage de leur
cycle cellulaire en G2 : phase G1 faible et
toutes les cellules se retrouvent en G2
Au bout d’un certain temps : disparition
complète du pic 2N - Certaines cellules ne se sont pas séparées,
pas de cytodiérèse : cellules à 8N
chromosome - polyploïdie : trop de matériel génétique que la normale
- Évaluation de la prolifération cellulaire avec la
phase S - Phase S beaucoup plus importante à droite :
prolifération plus élevée
