Cuantificacion por ELISA Flashcards
Cuales son los fenómenos en los que se basa la técnica de ELISA
- Alta especificidad de un Anticuerpo por un Antígeno (Rx inmunológica)
- Amplificación por una reacción química desarrollada por una enzima actuando sobre un sustrato que produce productos coloreados (Rx indicadora)
¿Qué ocurre en condiciones adecuadas con las enzimas que participan en los métodos de ELISA?
La enzima, en condiciones adecuadas de reacción, producirá el cambio
de color de un compuesto y este cambio puede cuantificarse mediante espectrofotometría.
Cuales son las características de la técnica ELISA
Posee una alta sensibilidad y especificidad
A que otra tecnica es comparable la tecnica ELISA
A la tecnica del radioinmunoensayo con la ventaja de que no requiere del uso de isotopos radioactivos
En que consiste el ELISA directo
El antígeno se adhiere de forma pasiva al fondo del pasillo, luego se lava, se añaden anticuerpos específicos para un epitope del antígeno. El anticuerpo posee una enzima que al conjugarse con su sustrato genera un producto coloreado.
En un ELISA directo la cantidad de color es ________________ a la concentración del antígeno que se adhirió a la placa.
Directamente proporcional
En que consiste el ELISA tipo Sandwich
En el fondo de la placa hay anticuerpos especificos para el antigeno a estudiar, luego se agrega la muestra con los antigenos de interes y una segunda porcion de anticuerpos para un segundo epitope del antigeno en estudio el que ademas viene con una enzima que se conjugara con su sustrato produciendo una reaccion coloreada directamente proporcional a la cantidad de antigenos que hay en la muestra
A que se le denomina ELISA indirecto
A que el revelado de la reacción se realiza con un anticuerpo secundario anti-Ig, ósea que tiene afinidad con el anticuerpo que en un primer paso se adhirió al antígeno de interés.
Cual es un ejemplo de ELISA indirecto
Prueba para VIH
Para que se utilizan principalmente los ELISA de tipo competitivo
Para moleculas de menor tamaño y que posee un solo epitope
En que consiste la tecnica del ELISA competitivo
En el fondo de la placa hay anticuerpo específico para ese antígeno, por lo que al incubar la muestra con el reactivo que posee el complejo antígeno-enzima, existirá una competencia por la unión a los anticuerpos. Para finalizar se adiciona el substrato para la enzima y así se formará el producto de color.
Para los ensayos competitivos existe una ____________ entre el color
producido y la concentración del antígeno a cuantificar.
Relación inversa
Cuales son las enzimas mas usadas para los ensayos de ELISA y a que longitud de de onda se leen?
- Fosfatasa alcalina - 405 nm
- Peroxidasa y puede leerse a 492, 450 o 415 nm dependiendo del sustrato a utilizar
- Beta-galactosidasa - 420
Que es la hormona TSH
Es la hormona estimulante de la tiroides, secretada por la adenohipofisis en respuesta a la hormona TRH liberada por el hipotalamo
¿Cual es la estrategia para cuantificar TSH?
usar anticuerpos contra la subunidad B-TSH ya que es especifica para esta horma
