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FRIA MACHO MARCELO > CRIOPRESERVACAO > Flashcards

CRIOPRESERVACAO Flashcards

1
Q

quais os objetivos de uma criopreservacao?

A

○ Aumentar longevidade p ser usado há mais tempo do q fresco e resfriado
○ Preservação de mat genetico - ato valor zootécnico ou em perigo de extinção
○ Pressernvacao da biodisvsidade
○ Aumento de heterozigose e reducao de consanguinidade

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2
Q

quais as vantagens da criopreservacao?

A

○ Guardar e usar por mais tempo
○ Mandar p mais longe
○ Evitar transporte de macho ate a fêmea e vice versa
○ Reprodução de aniamis em atv esportavia sem ter q parar
○ Preservação do semen congelado p sempre, desde q mantido o nivel de N no tanque - sem alteração do semen a longo prazo
○ Fácil distribuição do semen
○ Fertilização das femeas nas propriedades de origem
○ Uso em numero ilimitado de femeas - depende do numero de doses

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3
Q

quais as desvantagens da criopreservacao?

A

○ Causa mais danos aos esp do q resfriar
○ Queda de qualidade seminal - alteração em membrana plasmática
○ Investimento em botijao
○ Maior custo de IA
○ Relativamente poucas doses por coleta
○ Fertilidade menor
○ Menor tempo de vida do esp - lesoes em membrana q leva a reducao de tempo de vida
○ Percisa ter Intensificação do controle de cresc foliar

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4
Q

em termos de congelabilidade, qual a espécie com maior e menor congelabilidade?

A

maior congelabildiade = BOVINO
menor congelabilidade = SUÍNO

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5
Q

qual a composição das membranas biológicas?

A

BICAMADA FOSFOLIPIDICA
lipídeos
- fosfolipideos moveis
- colesterol
- glicolipideos

proteinas
- integrais
- perifericas

glicideos - carbs

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6
Q

é feito congelamento de semen suino?

A

gearlmente nao
- so resfria a 16-18˚C, antes da modificacao de membrana

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7
Q

qual a desvantagem do resfriamento de semen suino a 16-18˚C?

A

nao ha tanta reducao de tx metabolica e espermatozoide gasta mt atp e reduz fertilidade

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8
Q

quais as necessidades p uso da tecnica?

A
  • av de qalidade espermatica
  • av de longevidade espermatica
  • sistema de acondicionamento p transporte
  • assistência mv qualificada
  • boa comunicacao entre propriedades
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9
Q

o q e choque termico?

A

rearranjo proteico em certa região da memrbana, formando micela invertida permanente c fosfolipideos, oriundo de resfriamento inadequado
- conhece entre 18 e 8˚C = ocorre mudanca na conformacao da MP e forma micela invertida

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10
Q

quais as consequências do choque termico?

A
  • perda de ions e morte de esp
  • reducao de tx metabolica
  • aumento de permeabilidade
  • separação de prot e lipídios da MP
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11
Q

quais as doses inseminantes mínimas p semen resfriado e congelado?

A

RESFRIADO = 500 mi esp
CONGELADO = 200 mi esp

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12
Q

pq a dose inseminante minima é menor p semen congelado do q resfriado, msm q o congelamento gere mais danos?

A

msm gerando + danos, no congelamento, se induz ovulacao na egua e insemina em momento mais sincronizado, pois se reduz janela de ovulacao da femea

  • ja no semen resfriado, insemina-se a cad 48h, com menor controle de sincronização e antecipação de ovulacao, pq o semen tem mais motilidade e vigor
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13
Q

quais os fatores influenciam a sensibilidade ao choque temrico no esp de diferentes espécies?

A

1- proporção de colesterol:fosfolipideos
2- saturação da cauda de ac graxos
3- lipídeos predominantes
4- area de superfície da cabeca
5- ac graxos predominantes
6- comprimento da cadeia de ac graxos

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14
Q

quais os componentes básicos dos diluídores de resfriamento e congelamento?

A

RESFRIAMENTO = leite + glicose
CONGELAMENTO = gema + glicerol

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15
Q

qual deve ser o pp componente energetico do semen de eq?pq?

A

glicose, pq tem mais receptor p glicose do q p frutose

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16
Q

como a proporção de colesterol:fosfolipideos interfere no choque temrico?qual a espécie com menor proporcao de colesteorl?

A

quanto mais colesteorl, maior resistência ao choque
- suino tem menos colesterol

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17
Q

como a saturação da cauda de ac graxos interfere no choque temrico? qual especie tem menor quant de insaturacoes?

A

quanto maior o numero de insaturacoes, + resistente ao choque termico
- eq tem menor quant dee insaturacoes

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18
Q

como o lipideo predominante interfere no choque temrico?

A

FOSFATIDILCOLINA - favorece choque temrico (eq e suino)
PLASMENILCOLINA - mais proteção contra choque termico (bov)

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19
Q

como a proporção de colesterol:fosfolipideos interfere no choque temrico? qual espécie tem maior susceptibilidade?

A

quanto maior area de superfície de cabeca, mais sensível ao choque
- suino - maior area de superfície de cabeca

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20
Q

como os ac graxos predominantes interferem no choque temrico?

A

apenas nos equinos
- composicao de fosfolipideos entre os garanhoes causa diferença de resistencia e sensibilidade

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21
Q

como o comprimento da cadeia de ac graxos interfere no choque temrico?

A

quanto mais cumprida a cadeia, mais sensível ao choque

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22
Q

do q os danos espermático s sao resultantes?

A

○ Altraecao de estrutura das membranas
○ Toxicidade de sais
○ Desidratação
○ Formacao de gelo intracelular
○ Flutuações de volume celular pela area de superfície
○ Choque osmótico
○ Deseq metabolico - lesiona memrbana

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23
Q

quais as 3 formas de desidratação do esp

A
  • perda de agua pela diferenca de osmolaridade apos adc de diluidor
  • agua extracelular congela primeiro q o esp, pq a MP protege o esp, de modo q ocorre perda de agua p meio extracelular
  • aumetno de osmolaridade
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24
Q

o q acontece com a osmolaridade apos adc de diluidor?

A

aumenta de 300 mil p 800 mil

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25
Q

qual o objetivo da desidratação?

A

retirar água intracelular p evitar cristalizar ao

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26
Q

o q e o efeito solucao?

A

quando o congelamento é mt lento, o meio extracelular se concentra mt e fica toxico ao esp

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27
Q

quais as consequencias de uma tx de congelamento mt lenta e mt rapida?

A

lenta - efeito solucao
rapida - cristais de gelo intracelular

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28
Q

quais devem ser os 3 cuidados p reduzir danos ao esp durante congelamento?

A

1- diluidor com crioprotetor
2- controlar tx de resfriamento na 1 etapa
3- controle de congelamento e descongelamento

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29
Q

qual tipo de crioprotetor deve ser usado p congelamento?

A

crioprotetor penetrante - p temp abaixo de 0˚C

30
Q

quais os beneficios do uso de crio protetores penetrantes?

A
  • evita efeito solucao
  • aumenta area do esp a ser congelada
  • impede formacao de cristais de gelo
  • auemnta area de solucao nao congelada
31
Q

o q determina a velocidade de resfriamento?

A

o diluidor usado

32
Q

qual deve ser a velocidade de resfriamento de um diluidor com GLICEROL?

A
  • resfriamento lento
    < 0,33˚c/min
  • pq glicerol entra aos poucos na MP
33
Q

qual deve ser a velocidade de resfriamento de um diluidor com AMIDAS?

A

resfriamento rapido
>1˚C/,in
- amida entra rapidamente na MP e se demora a resfriar, amida pode ficar em excesso e gerar toxicidade

34
Q

como deve ser o descongelamento em um congelamento lento? qual a consequência se ocorre o contrario?

A

descongelamento lento
- p dar tempo de o esp se reidratar
- senão esp morre desidratado

35
Q

como deve ser o descongelamento em um congelamento lento? qual a consequência se ocorre o contrario?

A

descongelamento rapido
- se demora a descongelarem, os cristais de gelo intracelular formados no congelamento rapido se unem e forma grandes cristais, q geram lesao de membrana

36
Q

quais as caract de um bom diluidor de semen?

A

○ Osmolaridade
○ Ph neutro
○ Propriedade tampão
○ Atóxico
○ Não dificultar exame microscópico
○ Estável após estocagem
○ Barato e de fácil aqisicao
○ Substrato p esp - energia p continuar c bom metab

37
Q

quais componentes imporante presente no leite e na gema de ovo? pq sao importantes?

A
  • leite = CASEÍNA
  • ovo = LDL
  • ambos impedem capacitação in vitro antecipada ao se ligar as prot capacitantes do plasma seminal, reduzindo retirada de colesterol
38
Q

qual deve ser o momento da IA com semen resfriado?

A

1- avaliacao de fólico pre ov
2- folic pre ov com min de 35 mm insemina
3- faz us p chegar se houve ovulacao e deve encontrar o corpo lúteo
4- se n tiver ovulado, faz nova IA apos 48h

39
Q

qual o tempo de viabilidade do semen fresco/resfriado?

A

48h

40
Q

no resfriamento, qual a concentração ideal após adc diluidor?

A

entre 25 ee 50 mi de esp

41
Q

no resfriamento, qual o volume ideal da DI ?

A

entre 20-50 ml

42
Q

qual o numero de esp viaveis no momento da IA, tanto em viagens curtas quanto em logan’s?

A

viagem curta = 500 mi esp viaveis
viagem longa (50% de perda) = 1 bi esp viaveis

43
Q

qual o minimo da diluição no semen resfriado?

A

min de 2x + diluidor q semen

44
Q

quantos mi de esp/ml se deve ter apos adc de diluidor?

A

entre 25 e 50 mi esp

45
Q

como calcular o volume de semen na DI no resfriamento?

A

500 mi esp viaveis/ x esp viaveis
ou
1 bi esp viaveis/ x esp viaveis

46
Q

no resfriamento, como calcular a quant de DI?

A

vol semen/vol semen na DI

47
Q

no resfriamento, como calcular o volume de diluente total necessário?

A

vol esp total x diluição usada

48
Q

como deve ser a ordem do calculo no resfriamento de semen?

A

1- calculo da diluição
2- calculo de esp viaveis/ml
3- calculo de mLs de semen na DI
4- calculo de quant de diluídor
5- calculo de quant de DI

49
Q

qual a formula da concentracao espermatica?

A

esp contados/2
————————
1/10 x 1/5 x 1/100

50
Q

a q temperatura fica o semen refrigerado?

A

5˚C

51
Q

a q temperatura fica o semen congelado?

A

-196˚C

52
Q

quais as 13 etapas do congelamento de semen?

A

1- coleta de semen do garanhao com vagina artificial
2- av de caract seminais
3- adc de diluidor de resfriamento 1:1 + av de motilidade
4- centrifugação com 450-600 giros/10 min
5- descarte de 90% do sobrenadante
6- homogeneizar sedimento
7- calculo da concentração do semen concentrado
8- adc de volume de diluente calculoado + av de motilidade
9- envase em palhetas de 0,5ml + selagem
10- resfriamento ate 5˚C
11- por palhetas no valor de Nliq
12- mergulhar palhetas no N2 liq
13- descongelar palhetas p calculo da DI

53
Q

qual o defeito mais comum no semen congelado?

A

cauda enrolada

54
Q

qual deve ser a motilidade progressiva mínima de um esp p congelar?

A

maior ou igual a 50

55
Q

quando se avalia motilidade nas etapas do congelamento?

A

logo apos a coleta e apos a adc de qualquer subst

56
Q

qual o tempo e a quant de giros da centrifugação do semen p congelamento?

A

450-600 giros/10 min

57
Q

qual o objetivo da centrifugação nas etapas do congelamento?

A

retirar plasma seminal, q causa capacitação in vitro

58
Q

pq apos a centrifugação p congelamento do semen se mantem 10% do sobrenadante?

A

tem antixoxidantes improantes no plasma

59
Q

quantos % do sobrenadante deve ser retirado após centrifugação p congelamento?

A

90%

60
Q

como deve ser o calculo da concentração do semen concentrado pos centrifugação no cogenlametno?

A

1 - calcular [] usando diluição 1/400
2- calculo de adc de diluidor a partir do volume final
Vi x []i = Vf x []f
[]f é fixa em 100 x 10 a 6 esp/ml
3- adc de diluente
Vf-Vi = volume de diluente

61
Q

qual a diluição usada no calculo da concentração de semen após centrifugação no congelamento?

A

1/400

62
Q

no processo de congelamento, como deve ser a introducao das palhetas no vapor de N liq? qual tempo o devem ficar?

A

palhetas devem estar a 2,5-3 cm acima do N2 liq
20 min a temp de -80 a -120˚C

63
Q

como deve ser o descongelamento das palhetas p calculo da DI?

A

a 37˚C por 30 seg

64
Q

apos descongelar palhetas, qual deve ser a motilidade minima ideal?

A

maior ou igual a 30%

65
Q

quais os 3 cálculos a serem feitos apos descongelamento do esp?

A

1- quant de DI
2- quant palhetas/DI
3- volume da DI

66
Q

qual a DI minima do semen congelado?

A

200 mi esp viaveis

67
Q

quais os 4 passos p calcular quant de DI no semen congelado?

A

a- []f x 0,5 ml de palheta = esp totais
b- esp totais/palheta x MT = quant esp viaveis/palheta
c - DI = 200 mi esp viaveis//quant de esp viaveis por palheta
d - volume final/volume de cada DI

68
Q

no semen congelado, como calcular quant palhetas/DI?

A

200 mi esp viávels /quant esp viaveis por palheta

69
Q

como calcular o volume da DI no semen congelado?

A

quant palhetas de 0,5ml/2

70
Q

no semen congelado, como insemrinar as eguas?

A

com pipeta intrauterina profunda

71
Q

no semen congelado, qunado insemrinar as eguas?

A

quando o folic pre ov atinge 35mm induz ovulacao com HCG ou gnrh
volta 24h p ver se ovulou
se n ovulou, volta a cada 6h

72
Q

no semen congelado, onde insemrinar as eguas?

A

prox da junção utero tubarica, com pipeta intrauterina profunda
pq est tem q chegar na tuba antes de 6h, pois e quando ocorre lib de neutrofilos

FRIA MACHO MARCELO (2 decks)

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