CRIOPRESERVACAO Flashcards
quais os objetivos de uma criopreservacao?
○ Aumentar longevidade p ser usado há mais tempo do q fresco e resfriado
○ Preservação de mat genetico - ato valor zootécnico ou em perigo de extinção
○ Pressernvacao da biodisvsidade
○ Aumento de heterozigose e reducao de consanguinidade
quais as vantagens da criopreservacao?
○ Guardar e usar por mais tempo
○ Mandar p mais longe
○ Evitar transporte de macho ate a fêmea e vice versa
○ Reprodução de aniamis em atv esportavia sem ter q parar
○ Preservação do semen congelado p sempre, desde q mantido o nivel de N no tanque - sem alteração do semen a longo prazo
○ Fácil distribuição do semen
○ Fertilização das femeas nas propriedades de origem
○ Uso em numero ilimitado de femeas - depende do numero de doses
quais as desvantagens da criopreservacao?
○ Causa mais danos aos esp do q resfriar
○ Queda de qualidade seminal - alteração em membrana plasmática
○ Investimento em botijao
○ Maior custo de IA
○ Relativamente poucas doses por coleta
○ Fertilidade menor
○ Menor tempo de vida do esp - lesoes em membrana q leva a reducao de tempo de vida
○ Percisa ter Intensificação do controle de cresc foliar
em termos de congelabilidade, qual a espécie com maior e menor congelabilidade?
maior congelabildiade = BOVINO
menor congelabilidade = SUÍNO
qual a composição das membranas biológicas?
BICAMADA FOSFOLIPIDICA
lipídeos
- fosfolipideos moveis
- colesterol
- glicolipideos
proteinas
- integrais
- perifericas
glicideos - carbs
é feito congelamento de semen suino?
gearlmente nao
- so resfria a 16-18˚C, antes da modificacao de membrana
qual a desvantagem do resfriamento de semen suino a 16-18˚C?
nao ha tanta reducao de tx metabolica e espermatozoide gasta mt atp e reduz fertilidade
quais as necessidades p uso da tecnica?
- av de qalidade espermatica
- av de longevidade espermatica
- sistema de acondicionamento p transporte
- assistência mv qualificada
- boa comunicacao entre propriedades
o q e choque termico?
rearranjo proteico em certa região da memrbana, formando micela invertida permanente c fosfolipideos, oriundo de resfriamento inadequado
- conhece entre 18 e 8˚C = ocorre mudanca na conformacao da MP e forma micela invertida
quais as consequências do choque termico?
- perda de ions e morte de esp
- reducao de tx metabolica
- aumento de permeabilidade
- separação de prot e lipídios da MP
quais as doses inseminantes mínimas p semen resfriado e congelado?
RESFRIADO = 500 mi esp
CONGELADO = 200 mi esp
pq a dose inseminante minima é menor p semen congelado do q resfriado, msm q o congelamento gere mais danos?
msm gerando + danos, no congelamento, se induz ovulacao na egua e insemina em momento mais sincronizado, pois se reduz janela de ovulacao da femea
- ja no semen resfriado, insemina-se a cad 48h, com menor controle de sincronização e antecipação de ovulacao, pq o semen tem mais motilidade e vigor
quais os fatores influenciam a sensibilidade ao choque temrico no esp de diferentes espécies?
1- proporção de colesterol:fosfolipideos
2- saturação da cauda de ac graxos
3- lipídeos predominantes
4- area de superfície da cabeca
5- ac graxos predominantes
6- comprimento da cadeia de ac graxos
quais os componentes básicos dos diluídores de resfriamento e congelamento?
RESFRIAMENTO = leite + glicose
CONGELAMENTO = gema + glicerol
qual deve ser o pp componente energetico do semen de eq?pq?
glicose, pq tem mais receptor p glicose do q p frutose
como a proporção de colesterol:fosfolipideos interfere no choque temrico?qual a espécie com menor proporcao de colesteorl?
quanto mais colesteorl, maior resistência ao choque
- suino tem menos colesterol
como a saturação da cauda de ac graxos interfere no choque temrico? qual especie tem menor quant de insaturacoes?
quanto maior o numero de insaturacoes, + resistente ao choque termico
- eq tem menor quant dee insaturacoes
como o lipideo predominante interfere no choque temrico?
FOSFATIDILCOLINA - favorece choque temrico (eq e suino)
PLASMENILCOLINA - mais proteção contra choque termico (bov)
como a proporção de colesterol:fosfolipideos interfere no choque temrico? qual espécie tem maior susceptibilidade?
quanto maior area de superfície de cabeca, mais sensível ao choque
- suino - maior area de superfície de cabeca
como os ac graxos predominantes interferem no choque temrico?
apenas nos equinos
- composicao de fosfolipideos entre os garanhoes causa diferença de resistencia e sensibilidade
como o comprimento da cadeia de ac graxos interfere no choque temrico?
quanto mais cumprida a cadeia, mais sensível ao choque
do q os danos espermático s sao resultantes?
○ Altraecao de estrutura das membranas
○ Toxicidade de sais
○ Desidratação
○ Formacao de gelo intracelular
○ Flutuações de volume celular pela area de superfície
○ Choque osmótico
○ Deseq metabolico - lesiona memrbana
quais as 3 formas de desidratação do esp
- perda de agua pela diferenca de osmolaridade apos adc de diluidor
- agua extracelular congela primeiro q o esp, pq a MP protege o esp, de modo q ocorre perda de agua p meio extracelular
- aumetno de osmolaridade
o q acontece com a osmolaridade apos adc de diluidor?
aumenta de 300 mil p 800 mil
qual o objetivo da desidratação?
retirar água intracelular p evitar cristalizar ao
o q e o efeito solucao?
quando o congelamento é mt lento, o meio extracelular se concentra mt e fica toxico ao esp
quais as consequencias de uma tx de congelamento mt lenta e mt rapida?
lenta - efeito solucao
rapida - cristais de gelo intracelular
quais devem ser os 3 cuidados p reduzir danos ao esp durante congelamento?
1- diluidor com crioprotetor
2- controlar tx de resfriamento na 1 etapa
3- controle de congelamento e descongelamento
qual tipo de crioprotetor deve ser usado p congelamento?
crioprotetor penetrante - p temp abaixo de 0˚C
quais os beneficios do uso de crio protetores penetrantes?
- evita efeito solucao
- aumenta area do esp a ser congelada
- impede formacao de cristais de gelo
- auemnta area de solucao nao congelada
o q determina a velocidade de resfriamento?
o diluidor usado
qual deve ser a velocidade de resfriamento de um diluidor com GLICEROL?
- resfriamento lento
< 0,33˚c/min - pq glicerol entra aos poucos na MP
qual deve ser a velocidade de resfriamento de um diluidor com AMIDAS?
resfriamento rapido
>1˚C/,in
- amida entra rapidamente na MP e se demora a resfriar, amida pode ficar em excesso e gerar toxicidade
como deve ser o descongelamento em um congelamento lento? qual a consequência se ocorre o contrario?
descongelamento lento
- p dar tempo de o esp se reidratar
- senão esp morre desidratado
como deve ser o descongelamento em um congelamento lento? qual a consequência se ocorre o contrario?
descongelamento rapido
- se demora a descongelarem, os cristais de gelo intracelular formados no congelamento rapido se unem e forma grandes cristais, q geram lesao de membrana
quais as caract de um bom diluidor de semen?
○ Osmolaridade
○ Ph neutro
○ Propriedade tampão
○ Atóxico
○ Não dificultar exame microscópico
○ Estável após estocagem
○ Barato e de fácil aqisicao
○ Substrato p esp - energia p continuar c bom metab
quais componentes imporante presente no leite e na gema de ovo? pq sao importantes?
- leite = CASEÍNA
- ovo = LDL
- ambos impedem capacitação in vitro antecipada ao se ligar as prot capacitantes do plasma seminal, reduzindo retirada de colesterol
qual deve ser o momento da IA com semen resfriado?
1- avaliacao de fólico pre ov
2- folic pre ov com min de 35 mm insemina
3- faz us p chegar se houve ovulacao e deve encontrar o corpo lúteo
4- se n tiver ovulado, faz nova IA apos 48h
qual o tempo de viabilidade do semen fresco/resfriado?
48h
no resfriamento, qual a concentração ideal após adc diluidor?
entre 25 ee 50 mi de esp
no resfriamento, qual o volume ideal da DI ?
entre 20-50 ml
qual o numero de esp viaveis no momento da IA, tanto em viagens curtas quanto em logan’s?
viagem curta = 500 mi esp viaveis
viagem longa (50% de perda) = 1 bi esp viaveis
qual o minimo da diluição no semen resfriado?
min de 2x + diluidor q semen
quantos mi de esp/ml se deve ter apos adc de diluidor?
entre 25 e 50 mi esp
como calcular o volume de semen na DI no resfriamento?
500 mi esp viaveis/ x esp viaveis
ou
1 bi esp viaveis/ x esp viaveis
no resfriamento, como calcular a quant de DI?
vol semen/vol semen na DI
no resfriamento, como calcular o volume de diluente total necessário?
vol esp total x diluição usada
como deve ser a ordem do calculo no resfriamento de semen?
1- calculo da diluição
2- calculo de esp viaveis/ml
3- calculo de mLs de semen na DI
4- calculo de quant de diluídor
5- calculo de quant de DI
qual a formula da concentracao espermatica?
esp contados/2
————————
1/10 x 1/5 x 1/100
a q temperatura fica o semen refrigerado?
5˚C
a q temperatura fica o semen congelado?
-196˚C
quais as 13 etapas do congelamento de semen?
1- coleta de semen do garanhao com vagina artificial
2- av de caract seminais
3- adc de diluidor de resfriamento 1:1 + av de motilidade
4- centrifugação com 450-600 giros/10 min
5- descarte de 90% do sobrenadante
6- homogeneizar sedimento
7- calculo da concentração do semen concentrado
8- adc de volume de diluente calculoado + av de motilidade
9- envase em palhetas de 0,5ml + selagem
10- resfriamento ate 5˚C
11- por palhetas no valor de Nliq
12- mergulhar palhetas no N2 liq
13- descongelar palhetas p calculo da DI
qual o defeito mais comum no semen congelado?
cauda enrolada
qual deve ser a motilidade progressiva mínima de um esp p congelar?
maior ou igual a 50
quando se avalia motilidade nas etapas do congelamento?
logo apos a coleta e apos a adc de qualquer subst
qual o tempo e a quant de giros da centrifugação do semen p congelamento?
450-600 giros/10 min
qual o objetivo da centrifugação nas etapas do congelamento?
retirar plasma seminal, q causa capacitação in vitro
pq apos a centrifugação p congelamento do semen se mantem 10% do sobrenadante?
tem antixoxidantes improantes no plasma
quantos % do sobrenadante deve ser retirado após centrifugação p congelamento?
90%
como deve ser o calculo da concentração do semen concentrado pos centrifugação no cogenlametno?
1 - calcular [] usando diluição 1/400
2- calculo de adc de diluidor a partir do volume final
Vi x []i = Vf x []f
[]f é fixa em 100 x 10 a 6 esp/ml
3- adc de diluente
Vf-Vi = volume de diluente
qual a diluição usada no calculo da concentração de semen após centrifugação no congelamento?
1/400
no processo de congelamento, como deve ser a introducao das palhetas no vapor de N liq? qual tempo o devem ficar?
palhetas devem estar a 2,5-3 cm acima do N2 liq
20 min a temp de -80 a -120˚C
como deve ser o descongelamento das palhetas p calculo da DI?
a 37˚C por 30 seg
apos descongelar palhetas, qual deve ser a motilidade minima ideal?
maior ou igual a 30%
quais os 3 cálculos a serem feitos apos descongelamento do esp?
1- quant de DI
2- quant palhetas/DI
3- volume da DI
qual a DI minima do semen congelado?
200 mi esp viaveis
quais os 4 passos p calcular quant de DI no semen congelado?
a- []f x 0,5 ml de palheta = esp totais
b- esp totais/palheta x MT = quant esp viaveis/palheta
c - DI = 200 mi esp viaveis//quant de esp viaveis por palheta
d - volume final/volume de cada DI
no semen congelado, como calcular quant palhetas/DI?
200 mi esp viávels /quant esp viaveis por palheta
como calcular o volume da DI no semen congelado?
quant palhetas de 0,5ml/2
no semen congelado, como insemrinar as eguas?
com pipeta intrauterina profunda
no semen congelado, qunado insemrinar as eguas?
quando o folic pre ov atinge 35mm induz ovulacao com HCG ou gnrh
volta 24h p ver se ovulou
se n ovulou, volta a cada 6h
no semen congelado, onde insemrinar as eguas?
prox da junção utero tubarica, com pipeta intrauterina profunda
pq est tem q chegar na tuba antes de 6h, pois e quando ocorre lib de neutrofilos
