Cours 3 : la cytométrie

Question 1

quels types de signaux on a en cytométrie?

comment obtenir le 2D scatter plot?

Answer 1

FCs : forxarded scatering (diff aux petits angles): proportionnel a la taille des cellules
SCS: scaterred scatering (diff aux grands angles): dépend de la complexité
FL1 : emission du 1 er fluo
FL2 : 2m fluo
FL3..
2/ en supperposant le FCS et SCS

Question 2

citez les 3 filtres utilisés pour collecter le signal?

Answer 2

passe bande []
// bas < a une landa
// haut > a une landa

Question 3

quels sont les deux spectres obtenus par cutométrie?

Answer 3

• histogramme bi-paramétrique (nuage de ponts) diparamétrique ( FCS et SCS) ou F1 en fnct de F2
• histogramme monoparamétrique (counts en fonction de l’intencité de fluo).

Question 4

Qu’est ce que le gating?

Question 5

quels sont les problèmes rencontrés en cytométrie?

Answer 5

• déformation du nuage de ponits aprés compensation
• recouvrements spectrales des spectres d’emission de fluorophores :faut éfféctuer des compensations des fluorescences
• autofluo des cellules
• peut y avoir des défauts (artéfactes) lors de la compensation.
• la visualisation des donnés par des dotplots est trés sensible au nombre de ponits et la saturation est rapide, c’est pour ça qu’on prèfére le contour plot, mais il est moins utilisé en analyses.

Question 6

pourquoi doit on eviter d’utiliser la fluorescine (FITC)?

Answer 6

• le spectre d’emission est trés proche de l’autofluorescence des tissus.
• son rendement quantique est faible

=> elle est à utilisaer lors des expériences à 2 fluo.

Question 7

sur compensation =*> __ estimation

sous compensation => __ estimation

Answer 7

sur compensation => sous estimation d’une population

Sous compensation => sur estimation d’une population faible.

Question 8

regions et gates?
gates
régions

Answer 8

reg et gates: utilisés pour identifier différentes sub-populations dans des expériences multicolores
régions : formes délimitant des sous populations
gates: definis lorsque une forme est utilisé pour isoler une sous population d’interet pour des études sépares (moy, med..)