Cours 3

Question 1

Plasmide vs Vecteur

Answer 1

plasmique
AND extrachromosomique
Généralement circulaire
réplication autonome
Retrouvé naturellement

Vecteur
Un plasmide manipulé génétiquement pour faciliter le clonage de l’ADN
Non naturels

Question 2

étapes du clonage moléculaire

Answer 2

Digestion
Ligation
Transformation
Sélection
Extraction
Diagnostic

Question 3

Caractéristiques utiles des vecteurs

Answer 3

• peuvent être introduits dans l’hôte
  (transformation=ADN introduit dans l’hôte ou transduction = introduit via bactériophage)
• peuvent se répliquer dans l’hôte
  (contient origine de réplication propre a l’hôte)
• contient plusieurs sites de restriction uniques
• contient au moins un marqueur de sélection
  (gène ne résistance)

Question 4

1- peuvent être introduit dans l’hôte (transformation)

Answer 4

Compétence = une culture bactérienne qui est prête à accepter l’ADN exogène

quelques méthodes pour rendre les culture compétente
1-sel de calcium
2-choc thermique
3-électroporation

Question 5

1-peuvent être introduits dans l’hôte (transduction)

Answer 5

inconvénient
-vecteurs et souche spécialisées

avantages
-insertion facile de l’ADN dans l’hôte
-possibilité de fabriquer et purifier l’ADN simple-brin

Question 6

2-Peuvent de répliquer dans l’hôte

Answer 6

Origines de réplication du plasmide
-permet au vecteur de se répliquer de façon autonome dans les cellules bactériennes
-permet d’obtenir un nbr de copie plus élevé que le génome
-répartition/propagation aléatoire lors de la division
-le nbr varie selon la nature de l’origine

Question 7

concept de Compatibilité des orifines

Answer 7

Lorsque 2 plasmide sont mis en même temps dans la même bactérie…what could happen

ORigine de réplication des plasmide ont un impact

-s’ils ont le même type d’origine de réplication, la bactérie va considérer que c’est le même morceau d’ADN
-donc, la bactérie va limiter le nombre de réplication en d’autres mots elle ne va pas additionner le nombre de copie qu’aurais du donner les deux plasmide séparer mais diviser le nombre d’un des plasmide entre les 2. La façon de diviser est complètement aléatoire

Donc risque de perdre des plasmides

Question 8

3- plasmide contient plusieurs sites de restriction uniques…pq impo

Answer 8

impo car si pas unique, quand enzyme arrive pour couper, va couper tout les autre site car pas unique et là devient trop compliqué. Ont veux une seule coupure et donc peut utiliser ses site pour mettre des insert.
-MCS: multiple cloning site
site ou se trouve des site de restriction unique
(idéale pour couper et liguer des inserts)
-Orientation peut varier

Question 9

4-contient au moins un marqueur de sélection

Answer 9

gène de résistance antibiotique
(permet à la bactérie de croitre sur un milieu contenant l’antibio spécifique)

Selection simple
(les bactéries qui forment des colonies possèdent le vecteur/plasmide)

Question 10

comment distinguer les vecteurs vides de ceux qui ont l’insert?

Question 11

Résistance antibiotique et colonies satellites

Answer 11

certains gènes de résistance antibiotiques sont sécrétés par la bactérie

des petites colonies sans gène de résistance donc sans vecteur peuvent profiter de la baisse de concentration d’antibio autour des grosses colonies qui sécrètent le facteur de résistance