cours 2 : microscope Flashcards
2 grands type de microscope
électronique et photonique
différence majeur entre microscope électronique et photonique
le grossissement est plus grande avec électronique que photonique
Composés essentiel du microscope + rôles (3)
COndensateur : module la lumière
Objectif et Oculaire : agrandissent l’image
Limite de l’agrandissement du microscope photonique
- limite de résolution : distance minimal entre 2 points qui peuvent être distincts (formule pour le calcul à la page 7
- Constrate (capacité de distinguer une structure de son environnement )
Comment augmenter les capacités (surmonter la limite) du microscope photonique (3) avec exemple
1- Jouer sur la longueur d’onde
exemple : utiliser longueur d’onde ultraviolet au lieu de longueurs d’onde visible. verre transparent ne dévie pas UV donc besoin d’un verre opaque soit verre en quartz.
2- l’indice de réfraction du milieu.
exemple : en utilisant une substance avec un indice de réfraction proche du verre (1,5) comme l’huile (1,56), les faisceaux de lumière sont moins déviés donc + concentrés
3- teta =1/2 l’angle du cône de lumière entrant dans l’objectif. ON aura un plus grans grossissment, si on augmente la distance de travail soit verticalement ??
Problème avec longueur d’Onde UV sur microscope
on ne peut pas directement les voir. besoin de faire de faire des transformation optique pour être capable de voir les objets avec UV” CONSÉQUENCE : L’image est moins précise et détaillée.
Le contraste est proportionnel à….
la différence de quantité de lumière absorbé.
C’est à dire la différence entre l’environnement et l’Objets à observer. s’ils absorbent la même quantité contraste très faible
Microscopes a fond clair : faible ou grand contrate ?
faible contraste, mais la mobilité des organismes (préparation à l’état frais) compense.
À quoi sert essentiellement le microscope à fond clair ?
observation de l’axe de division cellulaire chez les protozoaires + observation des corps d’inclusion cytoplasmique (granules indiquant infection) chez les microorganisme de grande taille.
Comment augmenter le contraste ?
Coloration
type de coloration (4)
- Coloration différentiel de Gram
- Coloration différentiel Alcoolo-acido-résistance
-Coloration simple : un seul colorant
-Coloration (pas sûr pour celui là à vérifier)
Coloration simple descritption + avantages et inconvénient
coloration au bleu de méthylène (+), car la grande majorité des surfaces bactériennes sont négatives. Offre une coloration uniforme. Désavantage : pas de contraste et organisme mort (voir figure 2.16)
Coloration différentiel de Gram description + avantages et inconvénient
Observation selon réaction au colorant (rétention ou rejet). Si la surface est positive, la structure retient la couleur violet, si la surface est négative, la structure rejettent la couleur violet et devient rouge.
L’Avantage est que l’on peut visualiser les différentes structure (fort contraste) et L’inconvénient comme pour toute autres coloration, les microorganismes sont morts.
Coloration différentielle alcoolo-acido-résistance descritption + avantage et inconvénient
Les mycobactéries de la tuberculose retiennent le carbol fuschine qui apparait très nettement avec cette coloration différentielle (donne des batonnet mauve).
L’Avantage est que l’on peut visualiser les différentes structure (fort contraste) et L’inconvénient comme pour toute autres coloration, les microorganismes sont morts.
Caractéristiques et différence du microscope sur fond noir
Le fond est noir et la structure claire, car les rayon lumineux sont dévié (visulation des rayons déviés seulement)
DIfférence dans structure :
- le condensateur contient un cône de Abbe + miroirs
- l’éclairage est oblique justement pour déviation de la lumière. (voir figure 2.6)
Avantage du microscope à fond noir
IL y a un grand contraste sans coloration ni fixation, ce qui permet d’observer des structures vivantes.
Caractéristique et différence du microscope à contraste de phase
même fonctionnement que microscope à fond noir mais cette fois-ci inversé, le fond est clair et la cellule est noir avec contraste à cause des structure de densités différentes (réfraction de la lumière différente)
POur ce faire, le condensateur et l’objectif ont des anneaux de phase qui joue avec la lumière (mise en phase de la lumière incidente) Changement de phase de la lumière à cause de la réfraction de la lumière par les structures cellulaires.
Avantages du microscope à contraste de phase et désavantage
plus performant que le microscope à fond noir. Visualiation plus détaillé et fine des strcutures sans coloration (cellules vivantes)
Désavantage : halo de diffraction
qui a inventé le microscope à contraste diférentielle ?
Nomarski
Comment fonctionne le microscope à contraste différentielle ?
réfraction de la lumières différente d’une structure cellulaire à l’autre en raison de la lumière polarisé à angle variable (modification de la polarisation = réfraction différente)
On observe au microscope une coloration vive et un pseudo relief 3D
quelles sont les caractéristiques majeur du microscope à contraste d’interférence différentielle
différence dans le condensateur : système de lentilles polarisante contrôlées par informatique
Avantages et limites du microscope à contraste d’Interférence différentielle
Avantage : visualisation de structures fines sans coloration ni fixation, les cellules sont vivantes. absence de halo de diffraction normalement visible au microscope de contraste de phase.
Limite : Préparation transparente
Comment fonctionne le microscope à (épi)fluorescence ?
Coloration fluorescente au fluorochrome. le colorant absorbe la lumière UV qui devient visible grâce au filtre d’excitation et miroir dichnoique en quartz. le filtre sélectif (bloquant) est en verre.
Application du microscope à fluorescence (2)
1- distinction des cellules vivantes/mortes. les cellules vivante excluent par la membrane cytoplasmique les fluorochromes vitaux alors que les cellules mortes sont perméable
Énumération différentielle par logiciel d’analyse d’image
2- Immunofluorescence - couplage anticorps et fluorochromes pour détecter protéines et organismes
