Cours 1 - Cytosquelettes et protéines motrices Flashcards
Qu’est-ce que l’organisation sub-cellulaire?
- un compartiment interne chez les procaryotes
- plusieurs compartiments chez les eucaryotes : limité par 1 membrane ou par 2 membranes
Comment visualiser in vivo les mouvements de cargos au sein du cytoplasme?
Marquage de la mannosidase-GFP (protéine membranaire) + sarl-RFP
Observation au microscope confocal
Citer une autre méthode pour visualiser in vivo le mouvement de cargos au sein du cytoplasme
micoscopie sur fond clair
Quel est l’avantage d’observer le mouvement de cargo in vivo en microscopie sur fond clair par rapport à la microscopie confocal?
nécessite aucune préparation
Citer les différents cytosquelettes
- MT
- FA
- FI
Quel élément est essentiel au déplacement de cargos sur les rails du cytosquelette?
les protéines motrices
Comment faire pour montrer quel cytosquelette est impliqué dans un mouvement?
- on peut inhiber l’interaction avec le cargo
- on peut inhiber l’un des cytosquelette avec un drogue
Citer les différents inhibiteurs des cytosquelettes
- MT : colchicine, oryzalline, tubulazole (déstabilisateurs)/ taxol (stabilisateur)
- FA : cytochalazine, latrunculine (destabilisateurs) / phalloidine (stabilisateur)
Quelles sont les protéines motrices des MT?
MAPS :
- kinésine
- dynéine
Donner le sens du mouvement des 2 MAPS :
- mouvement kinésine-dépendant : vers le + du MT
- mouvement dynéine-dépendant : vers le - du MT
Quelless sont les caractéristiques des kinésines?
- vont vers le +
- ATP dép
- pas progressif de 8 nm
- mouvement en forme de bras de levier
Combien de familles de kinésines existe-t-il?
14 familles
Citer la kinésine particulière. En quoi est-elle particulière?
kinésine 14 : mouvement vers le - du MT
Quel domaine influe sur l’activité de la kinésine?
le domaine moteur
Où se trouve le domaine moteur dans les kinésines?
- soit en N-ter
- soit au milieu
- soit en C-ter
Quelle est l’activité de la kinésine en fonction du positionnement du domaine moteur?
- N-ter : mouvement vers le + du MT
- au milieu : déstabilisatrice des MT
- C-ter : mouvement vers le - (kinésine 14)
Quelle est la particularité des protéines motrices chez les plantes?
les dynéines n’existent pas, elles sont enrichies en kinésine 14 pour les mouvements vers le -
Citer des marqueurs utilisés en immunomarquage?
- alexa 488
- cyanine
- rhodamine
- phaloidine (FA)
Qu’est-ce que le complexe dynactine?
complexe intermédiaire qui permet l’attachement du cargo à la dynéine
Quelle est la particularité des familles des dynéines?
elles sont spécifiques : cytoplasmiques, flagellaires, axonemal
Durant quel cycle cellulaire les dynéines jouent un rôle primordiales?
interphase et mitose
Quelle partie de la dynéine interagit avec le cargo?
Tout dépend du cargo à transporter. La liaison se fait soit sur les chaines lourdes, soit les chaines intermédiaires, soit les chaines légères
Quelle est la protéine motrice du cytosquelette d’actine?
Myosine
Quel est le mouvement de la myosine?
- ATP dép
- en bras de levier
Combien de familles de myosines existe-t-il?
17 familles
Quelle est la particularité des familles de myosines?
Le domaine moteur est commun, mais la partie caudale (queue) est divergeante
Dans quel type de tissus cellulaires agit la myosine 2?
contraction des muscles
Donner le sens du mouvement myosine-dépendant
vers le + du filament d’actine
Citer les 2 myosines particulières
Myosine 6 et 9 qui se déplacent vers le -
Quelle est la particularité de la myosine 6?
- se déplace vers le - du filament d’actine
- utilise un système mixte: soit les MT soit les filaments d’actine
Quel est le point commun entre les 3 protéines motrices : kinésine/dynéine/myosine?
tous ces mouvements sont ATP dépendants
Caractériser le mouvement polarisé dans les plantes
Mouvement vers le + du cytosquelette
Quel est le but du mouvement polarisé vers le + du tube pollinique?
Croissance pour pouvoir générer une membrane au niveau apical
Définir le tube pollinique
Le tube pollinique permet d’acheminer les gamètes vers l’ovule. La cellule génératrice (GC) permet de produire les gamètes
Quel test in vitro effectuer pour caractériser les mouvements des cytosquelettes?
immunomarquage AC anti-myosine et AC anti-kinésine
Qu’a montré l’immunomarquage in vitro contre la myosine et la kinésine?
- le mouvement de l’actine est plus rapide
- le mouvement de MT est plus lent
Donner la proportion des mouvements des vésicules de Golgi et des mitochondries
80 % sont actine-dépendants
20 % sont Mt-dépendants
Qu’a montré l’analyse fine des mouvements des mitochondries en présence d’inhibiteurs du cytosquelette?
- en dépolymérisant les MT, les mouvements s’accélèrent
- en dépolymérisant les FA, les mouvements sont bloqués
Quel type de mouvement les inhibiteurs touchent le plus?
les mouvements les plus rapides (actine)
Citer une méthode permettant de visualiser le mouvement de vésicules dans le tube pollinique
décoration en point de flèche
En quoi consiste la décoration en point de flèche?
- perméabilisation des cellules et fixation
- côté pointu vers le - (lent)
- côté barbé vers le + (dynamique)
Quelle est la polarité des mouvements de vésicules dans le tube pollinique?
- dans le cortex (périphérie du tube) : + vers la pointe du tube
- dans le tube : + vers le côté barbé
=> orientation opposée
Caractériser la croissance des vésicules dans la tube pollinique
- croissance polarisée vers le +
- actine-dépendant
Expliquer le rôle du cytosquelette lors de la neurulation
- les MT permettent de changer la morphologies des cellules (rectangulaires)
- l’actine va permettre de donner une forme en ‘bouteille’ = incurvation de la plaque neurale pour former le tube neural
Quel cytosquelette est indispensable pour la neurulation?
Les 2 cytosquelettes : MT et FA
Quelle est l’orientation du cytosquelette dans le neurone?
- axone : les cytosquelettes sont parallèles
- dendrites : les cytosquelettes sont en sens opposés
Définir les mouvements antérogrades et rétrogrades
- antérograde : kinésine, du corps axonal vers la synapse (du - vers le +)
- rétrograde : dynéine, de la cellule vers le corps axonal (du + vers le -)
Quelle méthode peut-on utiliser pour visualiser des mouvements du cytosquelette?
photoconversion
En quoi consiste la photoconversion?
marquage mEos2 : fluorochrome va révéler le cytosquelette. Il y a un flash laser et va transformer la couleur du fluorochrome
Peut-on réparer les cassures du cytosquelette?
Oui.
- MT et FA : uniquement sur les extrémités
- FI : sur tout le filament
- neurofilaments: ressouder par les MT
Qu’est que des mélanosomes?
cellules épidermiques
Nommer les drogues qui agissent sur les mélanosomes et leur effets
- MCH : agrégation
- MSH : dispersion
Quel rôle joue l’AMPc dans les mélanosomes?
L’AMPc permet la dispersion
Citer les rôles des 2 cytosquelettes dans les mélanosomes
- MT permettent une agrégation et une dispersion précoce
- FA permettent une dispersion tardive
Expliquer la compétition dynéine/kinésine dans les mouvements des mélanosomes
- dynéines : mouvement le - => agrégation
- kinésines : mouvement vers le + => dispersion précoce
Expliquer le phénomène de dispersion tardive
- L’AMPc phosphoryle la mélanophiline et va bloquer l’action des MT (pas d’agrégation)
- la mélanophiline phosphorylée se lie à la myosine V = dispersion
Quel cytosquelette est privilégié pour les mouvements des vésicules Golgiennes?
Filament d’actine car fin
Le cytosquelette microtubulaire peut-il intervenir dans le mouvement des vésicules golgiennes?
Oui : la kinésine 13A
Défini la cyclose
mouvement circulaire périphérique des chloroplastes dans le cytoplasme
Quelles sont les caractéristiques des mouvements de cyclose?
- ATP dépendant
- actine-dépendant
- liaison avec la myosine XI
Quel cytosquelette est privilégié pour le mouvement des chromosomes?
les MT
Comment s’appelle le mécanisme de réorientation des chromosomes?
recherche et capture
Définir le mécanisme de recherche et capture
- capture du kinétochore
- stabilisation
- réorientation des chromosomes : dynéine-dépendant
- mouvement des chromosomes : kinésine-dépendant
Quelle est la dynamique des MT en métaphase?
- fluorochrome vert pour les chromosomes
- fluorochrome rouge pour les MT
=> pas de mouvement des chromosomes (plaque équatoriale)
=> lignes obliques : déplacement des SU au sein du MT
=> les SU des MT migrent vers les pôles
=> incorporation de dimères de tubulines au kinétochores
Quelles est la dynamique des MT en anaphase?
Les chromosomes restent sur la plaque équatoriales, mais le signal perd en intensité
=> dépolymérisation importante des kinétochores
