CM3: Mutants. Crible. Sélection.

Question 1

Les mutations sont _____1 et _____2 par
les conditions expérimentales
- Certaines mutations permettent de ______3. aux
conditions imposées, d’autres sont _____4,
d’autres encore sont délétères
- On observe dans une condition de culture donnée
qu’un nombre ____5 de mutants produits

Answer 1

1. aléatoires
   2.non dirigées
   3.s’adapter
2. neutres
3. limité

Question 2

1. Comment alors isoler les mutants ? —>Quelles sont les pré-requis necessaires?
   2.Quelles sont les deux méthodes?

Answer 2

1- Toute cellule ou tout organisme dont la séquence du génome diffère par rapport à la séquence de référence.
* la mutation ne doit pas être neutre.
* Il faut être dans des conditions expérimentales qui permettent d’observer
l’effet de cette mutation et donc de pouvoir
« trier » les organismes mutants des organismes sauvages

2. Deux méthodes: Crible et sélection
   * **Crible : toutes les cellules ou organismes
   croissent mais on est capables de les distinguer
   (forme, couleur, taille…) et donc de les trier. **

*Sélection**: seuls les mutants ou les sauvages sont capables de croitre dans les conditions utilisées.
On sélectionne uniquement ceux qui nous intéressent.

Question 3

Quelle est la 1ere étape?

Answer 3

–>les faire croitre: séparer les organismes, les compter

–>Après dilution, étalement sur boites de Pétri
Chaque cellule formera une colonie

Question 4

Qu’est-ce qu’un milieu défini, et un complet?

Answer 4

Milieu défini: tous les composés sont connus–>ex: milieu minimum (H2O, glucose, etc)

Milieu complet: contient des ingrédients de composition chimique indeterminée (ex: milieu riche LB)

Question 5

Quelles cellules (mutant/sauvage) arrivent à
croitre sur : Un milieu minimum, Un milieu riche ? Un milieu défini ?

Answer 5

Un milieu minimum: cellules sauvages ne possédant aucune
auxotrophie
Un milieu riche: Toutes les cellules sauf celles dont la mutation affecte un gène essentiel à sa croissance qui ne peut être complémentée avec ce qu’elles trouvent dans le milieu de culture
(exemple: protéines de réplication, synthèse des ARN, traduction…)
Un milieu défini: Les cellules sauvages et les mutants qui trouvent
dans le milieu ce qu’elles ne peuvent pas synthétiser.

Question 6

Quels sont les trois types de mutants les plus étudiés en microbiologie?

Answer 6

Mutants de resistance: à des antibiotiques ou d’autres molécules (Ampicilline, Kanamycine, Chloramphénicol, G418, streptomycine, cycloheximide, tetracycline…)
Mutants auxotrophes: Exemple [Trp-]. Les souches ne peuvent pas synthétiser le Tryptophane et donc ne peuvent pas synthétiser
les protéines. Par contre si on rajoute dans le milieu du Trp elles vont croître.
Incapacité à utiliser une source de carbone: exemple: mutants [Gal-]. Mutants dans la voie d’assimilation ou de
dégradation du Galactose. Donc même si on rajoute dans le milieu du Galactose, les mutants ne peuvent pas croître).

Question 7

Comment isoler ces 3 trois types de mutants?

Answer 7

• Mutant de résistance à un antibiotique
  —>Crible positif (“Tuer les parents”: c’est-à-dire tuer les cellules non transformées)
• Mutant d’auxotrophie:
  —>Crible négatif: Sélectionner ce qui ne pousse pas dans
  certaines conditions
  » technique des répliques
• Mutant d’assimilation ou de dégradation
  —>Crible négatif

Question 8

Que sont les mutants indépendants?
Quelle est la méthode d’isolement?

Answer 8

Ce sont des mutants obtenus par des
évènements mutationnels différents.

Méthode d’isolement:
Pour obtenir des mutants indépendants il faudrait:
- multiplier les cultures - faire des dilutions, des étalements sur des milieux non sélectifs
- des répliques puis
- prélever une colonie par culture
OU
Mutagenèse pour obtenir des mutants indépendants auxotrophes chez des
microorganismes qui peuvent croitre sur boites
(bactéries, S. cerevisiae…)