CITOMETRIA FLUJO

Question 1

DEFINICIÓN

CITOMETRIA FLuJo

Answer 1

Técnica hace análisis cel
Varios parámetros
Suspensión cel identificar individual.

Question 2

COMPONENTES

Answer 2

• SISTEMA:

Fluidos

Óptico

Eléctrico

Question 3

SISTEMA FLUIDOS

Answer 3

Conduce cel corriente hidrodinamica
Hasta punto interrogación laser

Diferencia presión fluidos emite señal

+ diferencia presión / + cantidad cel procesada -seg.

Question 4

SISTEMA ÓPTICO

Answer 4

Laser / cámara flujo / espejo diacrónico / detector

Laser incide cel.

Utilizado diodo azul/rojo / violeta + long onda.

————————————————-

Espejos diacrónicos

Reflejan luz long onda
Pasa rayos varias long.

——————————————-

Señal fluorescente

Emitida Ag atraviesa espejo
Según long se refleja detector.

———————————

Conclusión :

Long onda emitida + haz luz láser
compatible
Excita suspensión.

Question 5

SISTEMA ELÉCTRICO

Answer 5

Cantidad dispersada intensidad emitida
Directa proporcional señal eléctrica

Traducida detector
Impulsos amplifica procesado.

Analiza mucha información.

Question 6

TECNICA

Answer 6

Reciben muestra sangre / cordón / medula
Control : temperatura / tiempo / conservación.

Sólidos - líquido isotónico

Sangre - anticoagulante

Máximo tiempo: sangre / medula / liq pleural

24horas.

Líquido encefalorraquideo= 30 min

Manipular con precaución.

Question 7

ETAPAS

Answer 7

• Obtención suspensión celular
• Marcado AC monoclonal flúor
• Adquisición
• Análisis citometro

Question 8

OBTENCIÓN SUSPENSIÓN CELULAR

Answer 8

Cel suspensión.

Analizar individualmente.

Disgregar método enzimático.

Agregar usando medios libres:
Cationes / anticoagulantes.

Cuentan cel existentes muestra
Sabiendo n cel suspensión
vs Ac monoclonales.
Centrífuga / filtración = utilizados.

Tiempo de vida son 24h a 22-25 grados.

Question 9

MARCADO AC MONOCLONAL + FLÚOR

Answer 9

Ac dirigido mol antigenico.

Marcan inmunofluorescencia directa cel estudio.

Ac sustancia fluorocromo.

Absorben luz y emiten fluorescencia
Long onda mayor.

Cel marcado = super citoplasma / núcleo.

Marcar cel contacto Ag monoclonal
Incuba + une Ac especifico
+ solución hemolizante.

Question 10

ADQUISION

Answer 10

Cel emite 2 señales luminosas

Fluorescente = cambia long onda

Dispersada = cambia dirección

Separa filtros y espejos.

——————————————

Luz dispersada

• Recta = compleja interna cel.
• Cónica = tamaño cel.

Question 11

ADQUISICIÓN PROCESO

Answer 11

Diferencia long onda absorbida vs emitida
STOKES SHIFF.

Intensidad fluorescencia
Depende cantidad molécula / fluorocromo usado.

Luz emitida = recogida detectores / fotomultiplicador / fotodetector previo paso filtro
Elimina y separa luz recogida.

Sistema eléctrico convierte señal luminosa en digital para procesado ordenador.

• Total todas existentes
• Ventana número bajo y concreto de células.

Question 12

ANÁLISIS CITOMETRO FLUJO

Answer 12

Gráfica / histograma / diagrama puntos.
Asociado parámetros dispersión luz / señal n-cel.

Gráficas :
eliminan zona intensidad fluorescencia emitida. GATTING.

Resultados se expresan porcentaje total cel
Necesario valor absoluto recuento celular.

Question 13

CALIBRADO

Answer 13

CITOMETRO debe ser calibrado
Resultado fiable y objetivo.
Sino afecta prueba.

• falta de protocolo
• aumento complejidad parametros
• disminución vida laser

Pasos:

• determinar voltaje
• ajuste umbral.
• calculo compensaciones fluorescencia.

EUROFLOW ha estandarizado todo esto.

Question 14

CONTROL CALIDAD

Answer 14

Buen funcionamiento,e instó

• calibrado diario
  Patrón normalidad
• revisar sistema óptico / señal alineación
• calidad muestra y reactivos

Control negativo.
Verifica resultados no son fallos de marcaje AC.

Control fluorocromo
Control isotopo
Titular Ac concentracion adecuada ensayo.