Chromatographie + HPLC + GC Flashcards
Quel composé a été récupéré en premier suite à cette chromatographie sur colonne (phase normal)?
1. A
2. B
3. C
4. D
5. E
6. Je ne sais pas
E, celui qui sort de la colonne en premier donc il est retenue moins longtemps, à cause qu’ils est le moins polaire (le plus d’instaurations)
Les composé vont être retenu selon leur polarité, donc plus le composés est polaire et plus il sera retenu
Une série d’AINS ont été analysés par HLPC en phase inverse et leurs facteurs de capacité ont été déterminés (NB : temps mort de 2 min)
Aspirine = 2,8
Naproxen = 9,2
Ibuprofène = 31
Diclofénac = 22,8
Paracétamol = 2.4
Un type de chromatographie se définit par :
A. Sa phase stationnaire
B. Sa phase mobile
C. Son type de support
D. La nature des intéractions
E. Toutes ces réponses
E.
En connaissant le coefficient de partage, comment est l’affinité d’un composé envers les différentes phases ayant un coefficient de partage K < 1 ?
A. Phase stationnaire :( et phase mobile :)
B. Phase stationnaire :) et phase mobile :(
réponse A
K = Cs / Cm
Que me permet de découvrir une analyse d’urine des principaux métabolites de la cafféines suite à une chromatographie liquide inverse ?
A. Quantité de café bu
B. L’activité métabolique du sujet
C. Identifier et quantifier
D. La prise de café
Me permet d’identifier et de quantifier, comme on peut déterminer une aire sous le pic on va être capable de quantifier les concentrations de composés qu’on avait dans notre solution
En exclusion stérique, qui sort en premier ?
A. Les petites molécules
B. Les moyennes molécules
C. Les grosses molécules
D. Je ne sais pas
C : les grosses molécules
Les phases stationnaires peuvent avoir des pores ou viennent se loger les petites molécules, mais passer une certaines tailles les molécules ne peuvent plus se loger
Les molécules qui passent tout droit, ce sont elles qui sont trop grosses pour les pores de la phase stationnaire
Quelle est la stabilité du produit ?(Superposition de chromatogramme)
1. Le Produit est stable
2. Il se forme des impuretés de plus grand poids moléculaires
3. Il se forme des impuretés de plus petits poids moléculaires
4. Il y a trop d’impuretés
2.
Les échantillons subissent des stress thermiques
On voit des dégradations avec le temps, puisque les impuretés sortent en premier ce sont des impuretés de poids moléculaires plus élevés
Test sur des chromatographies à exclusion stérique !!!! = test de stabilité
Sur une colonne échangeuse de cations qui est retenu ?
1. Les composés chargés positivement
2. Les composés chargés négativement
3. Les composés neutres
- Les composés chargés négativement et les composés neutre vont passer tout droit, servent à séparer les composés qui sont chargés positivement pour faire une intéractions avec un anion
Sur une colonne échangeuse de cations, quelles sont les ions qui aide l’affinité au charge positive
Force de la charge négative
Sulfate SO3- > phosphate HPO4- > carboxylique COO-
Sur une colonne échangeuse d’anions, qui est retenu ?
1. Composé chargés positivement
2. Composé chargés négativement
3. Composé neutre
- Composés chargés négativement
Sur une colonne échangeuse d’anions, quelles sont les ions qui aide l’affniité au charge négative ?
R4N+ > R3NH+ > R2NH2+ > RNH3 +
R4N+ retient mieux l’anion mettons
Quel énantionère sera le mieux retenu ? Suite à cette chromatographie d’affinité
- La L-éphédrine, car elle fait 3 intéractions versus la D-ephedrine qui en fait seulement 2
Nommez deux utilisations des chromatographie en phase supercritique
Test de dopage et séparation des sels biliaires
Dans la séparation des sels biliaire sur la chromatographie en phase supercritique, quelles sont les avantages de la méthode ?
Rapide et belle séparation
Dire si ce paramètre augmente ou diminuent l’efficacité de la colonne en chromatographie liquide : la vitesse d’élution très lente
Augmente la résolution des pics, leurs donne le temps de bien se réaliser/séparer (les équilibres de partages), par contre une vitesse d’élution lente augmente la diffusion longitudinale soit l’élargissement des pics
Bref augmente et diminue l’efficacité
Dire si ce paramètre augmente ou diminuent l’efficacité de la colonne en chromatographie liquide : diamètre important des particules de la phase stationnaire
Diminution de l’efficacité de la colonne, car augmente la résistance aux transferts de masse et à l’anisotropie d’écoulement
Vrai ou Faux ? L’une des façon de déterminé l’efficacité d’une colonne de chromatographie, est le nombre de plateaux théoriques
Plus le nombre de plateaux est faible et plus la chromatographie est efficace ?
Faux, plus le N est grand et plus la chromatographie est efficace
Vrai ou Faux ? L’une des façon de déterminé l’efficacité d’une colonne de chromatographie est la hauteur équivalente de plateaux théoriques et plus le H est faible et plus la chromatographie est efficace ?
Vrai
Dans une procédure standard, il faut que la colonne ait une efficacité supérieure à 30 000 plateaux théoriques /m. Laquelle de ces colonnes de 15cm correspond à ce standard ?
N1 = 5673
N2 = 4343
N3 = 1729
N/m = 37820
N/m = 28953
N/m = 11527
Vrai ou Faux ? Dans le facteur de traînée T»>1 est idéal pour la symmétrie ?
Faux, ce qui est idéal pour la symmétrie c’est T=1
Parmi ces couples, lesquels ne sont pas analysables par chromatographie ?
1. Hydrophile/lipophile
2. Acide/base
3. Réducteur/oxydant
4. Enzyme/substrat
5. Volatil/lourd
6. Monomère/polymère
3
Le temps de rétention dépend de :
1. La vitesse d’élution
2. Le type de colonne
3. L’analyste
4. La phase mobile
5. Toutes ces réponses
5.
Si un pic n’est pas gaussien, c’est :
1. Que l’HPLC est cassée
2. Que les conditions sont mal choisies
3. Normal
4. À causes de l’anisotropie d’écoulement
5. À cause de la diffusion longitudinal
6. À cause de la résistance au transfert de masse
2,3,4,5,6
Dire si ce paramètre augmente ou diminuent l’efficacité de la colonne en chromatographie liquide : petit diamètre de particule de la phase stationnaire
Augmente l’efficacité, diminue la résistance aux transfert de masse et à l’anisotropie d’écoulement
Dire si ce paramètre augmente ou diminuent l’efficacité de la colonne en chromatographie liquide : phase stationnaire épaisse
Diminue l’efficacité, car augmente la résistance aux transfert de masse
Dire si ce paramètre augmente ou diminuent l’efficacité de la colonne en chromatographie liquide : phase stationnaire mince
Augmente l’efficacité, car diminue la résistance au transfert de masse, sauf faut être sur qu’il y en aille assez
Dire si ce paramètre augmente ou diminuent l’efficacité de la colonne en chromatographie liquide : particules de la phase stationnaire très régulière
Augmente l’efficacité, car homogène donc diminue l’anisotropie d’écoulement, et la résistance au transfert de masse
Dire si ce paramètre augmente ou diminuent l’efficacité de la colonne en chromatographie liquide : particules de la phase stationnaires très irrégulières
Diminue l’efficacité, car augmente l’anisotropie d’écoulement et la résistance au transfert de masse
Dire si ce paramètre augmente ou diminuent l’efficacité de la colonne en chromatographie liquide : homogénéité de la taille des particules de la phase stationnaire
Augmente l’efficacité, car diminue l’anisotropie d’écoulement et la résistance au transfert de masse
Dire si ce paramètre augmente ou diminuent l’efficacité de la colonne en chromatographie liquide : grand coefficient de diffusion dans la phase stationnaire
Efficacité augmente car si la diffusion dans la phase stationnaire est facile, les équilibres se font facilement et la résistance aux transfert de masse est moindre
Dire si ce paramètre augmente ou diminuent l’efficacité de la colonne en chromatographie liquide : petit coefficient de diffusion dans la phase stationnaire
Diminue l’efficacité, si la diffusion est difficile dans la phase stationnaire, la résistance au transfert de masse augmente
Dire si ce paramètre augmente ou diminuent l’efficacité de la colonne en chromatographie liquide : grand coefficient de diffusion dans la phase mobile
Augmente la diffusion longitudinal, diminue l’EFFICACITÉ
Dire si ce paramètre augmente ou diminuent l’efficacité de la colonne en chromatographie liquide : petit coefficient de diffusion dans la phase mobile
Améliorer l’efficacité de la colonne en diminuant la diffusion longitudinal
On regarde des Rf d’une même ligne de référence, mes deux composés sont séparé de 0,3, est-ce que leur séparation sera bonne sur une colonne de silice ?
Oui, car elle dépasse 0,2
Dans un HPLC deux types de phases mobiles sont possibles, des phase mobile organique ou aqueuse, quelles sont les types de chromatographie pour les solvant organique ?
1. Phase normal
2. Phase inverse
3. Chromatographie ionique
4. Exclusion stérique
5. Perméation de gel (polymères)
1 et 5
Dans un HPLC deux types de phases mobiles sont possibles, des phase mobile organique ou aqueuse, quelles sont les types de chromatographie pour les solvant aqueux ?
1. Phase normal
2. Phase inverse
3. Chromatographie ionique
4. Exclusion stérique
5. Perméation de gel (polymères)
2,3,4
Lorsqu’on discute de rétention en phase inverse, je peux déterminer mon ordre d’élution seulement en regardant des logP, si j’ai logP =1, logP =0,8, logP=2, lequel sera le premier à sortir ?
Ce sera le logP=0,8, parce que plus le log est élevée et plus notre composé est retenu
Je regarde des chromatogrammes en phase inverse, sur un des chromatogrammes mon coéluant c’est le méthanol à 20% et pour un autre test des mêmes composés on met le méthanol à 50%
Quelle est l’effet sur le temps d’un telle changement ???
Le chromatogramme avec le méthanol à 50% se fera plus rapidement, car le méthanol étant en plus grande quantité il a plus d’affinité pour la phase mobile (apolaire) et donc l’expérience se déroule plus rapidement.
À quel pH le diazepam sera-t-il le mieux retenu en phase inverse ?
1. À pH 2
2. À pH 7
À pH de 7, car dans la phase inverse la phase stationnaire est apolaire et la phase mobile est polaire, ainsi comme les composés chargés ont une meilleure l’affinité avec l’eau, ce sont les composés non chargés qui reste collé à la phase stationnaire non polaire
Vrai ou Faux ?
Dans l’ordre d’élution en fonction du pH, si la proportion de non chargé d’une phase inverse est plus grande que la forme ionisé, alors le composé est moins retenu
Faux, il est plus retenu car puisque la phase stationnaire est apolaire et donc les composé neutre se lie mieux à la phase stationnaire
Vrai ou Faux ?
Dans un chromatogramme en phase inverse pH = pKA d’un des composés, ce composé est donc plus retenu
Vrai
Aspirine c’est lui avec un OH
Acide salicylique 2 OH
Comme c’est legacy L1 j’ai une colonne de RP-18
Je suis en phase inverse donc la phase stationnaire est apolaire (donc l’aspirine sort en dernier), car il est moins polaire que l’acide salicylique
Plus le volume d’élution est grand et plus mon composé est retenu
1. Méthanol /eau 80:20
2. Méthanol / eau 50:50
3.Méthanol 1 eau 20:80
Ensuite
1. Acetonitrole /eau/THF 50:40:10
2. Acetonitrile / eau 50:50
3. Méthanol/eau 50:50
Prédire l’ordre de sortie sur l’HPLC, sachant que ses composé sont éluer sur une colonne en phase inverse avec une phase mobile méthanol/eau
Phase stationnaire apolaire donc les composés polaire sorte le plus vite
1. Betamethasone
2. Prednisone
3. Bethametasone 17 ou 21-valerate
4. Bethametasone 17,21-dipropionate
Un mélange de trois acide aminés : Asp (pHi = 2,87), Arg (pHi = 10,76) et Leu (pHi = 6), sont soumis à une chromatographie échangeuse de cations. L’élution est effectué grâce à un tampon à pH de 6, quelle sera l’ordre d’élution ?
Asp le moins retenu pH trop faible devient négative donc quitte
Leu qui est neutre est le suivant
Arg est encore positif donc toujours sur la colonne
Un composé est élué sur GC et son temps de rétention réduit est de t’r = 15 min à 373K. A 363K, t’r = 20min.
Q1 = déduire les constantes m et b de ces informations
Q2 = prédire le temps de rétention à 353 K
1) log(t’r) = 1691/T -3.36
2) t’r = 26,9 min
Q1) Tr dépend de la polarité et de l’épaisseur de la phase stationnaire
B<A<C
Plus épais meilleurs sont les intéractions avec l’analyte et plus le temps de rétention est grabd
Q2)Plus le diamètre est petit et meilleurs sont les échanges et plus la séparation se fait vite
c<a<b
A) Valeurs de précision
B) RSD = (ro x100)/moyenne
Moyenne = 693
Écart-type = 1/5 x (690-693)2 + (695-693_2….. = 13,2
V= 13,2
Ro = 3,6
RSD = 5,24
Donc oui notre analyse rencontre ce système, car RSD <0,6%
Proposez des conditions chromatographiques pour analyser chacun de ces composés
- Type de colonne USP
- Exemple de phase mobile
- Détecteur
Adrénaline = chromatographie ionique échangeuse de cations, donc la phase stationnaire résine aminés anionique (L6, L17, L19), tampon aq acide
UV, réfractométrie, ELSD, MS
Acide ascorbique = chromatographie ionique échangeuse d’anions, donc la phase stationnaire résine aminés cationique (L12, L14), tampon aq basique (HCL)
UV, réfractométrie, ELSD, MS
Acide hyaluronique = filtration de gel, solvant aqueux (L25)
Pas de UV car pas de chromato, mais MS, réfractométrie et ELSD
Un échantillon de fentanyl USP est mélangé avec un standart interne non-ionisable mais de même Log P
Comment feriez-vous pour séparer les deux pics de ce mélange par HPLC ?
1) choix de la phase stationnaire
2) choix de la phase mobile
3) choix de la méthode d’élution
4) L’ordre d’élution?
1) Phase inverse L1,L2 (je vais utilisé un tampon acide pour changer le fentanyl et le rendre cationique et le faire sortir plus vite)
2) Phase mobile : aqueuse (pH 2-6) et méthanol
3) méthode avec gradient, meilleur séparation et possible grâce à leur temps de rétention différent
4) fentanyl en premier, les cpmposé chargé vont mieux avec la phase polaire
K’a = 0,74
K’b = 3,29
Na = 2775
Nb = 2472
Ha = 0,0108
Hb = 0,0121
MPEG = 2000g/mol
Mmonomère = 44g/mol
Déterminer le degré de polymérisation ?
Mpolymère/Mmonomère = 2000/44 = 45,45, donc 45 monomères dans un polymère
Vrai ou Faux ? Si on augmente la taille des groupes latéraux , on diminue la Tg
Faux
Un polymère thermoplastique passe de l’état rigide à l’état malléable par une élévation de température
Vrai
La température de fusion Tf décrit la température entre l’état solide ordonné et l’état liquide désordonné pour les zones amorphes du polymères
pour les zones cristallines !!!!
Pour déterminer la masse molaire du polymère on utilise souvent des méthodes de chromatographies
vrai
Comme la polarité de l’alcool est plus élevé, sa Tg est plus élevé, il faut chauffé plus pour changer de phase
Dans une rétention en phase inverse, quelle est le caractère d’un composé ayant un logP > 0
hydrophobe /llipophile
Dans une rétention en phase inverse, quelle est le caractère d’un composé ayant un logP < 0
hydrophile
Vrai ou Faux ? Plus ton log P est élevé et plus ton tr est élevé
Vrai
Entre du méthanol à 20% et du méthanol à 50% sur une chromatographie quels sera l’impact sur les temps de rétention?
Beaucoup plus court avec plus de méthanol
Vrai ou Faux ? dans l’ordre d’élution en fonction du pH, plus le pH est plus grand que le pKa et plus tu es retenu
Faux, Plus le pH est plus grand que le pKa et plus le temps de rétention est faible
