Chromatografie & HPLC Flashcards
Wat houdt chromatografie in?
scheiding van componenten in een monster gebaseerd op de distributie van de componenten tussen een stationaire fase en een mobiele fase.
Hiermee kan men dan verdere metingen doen.
In welke materiefase (gas - vloeibaar - vast) kan elke fase (stationair - mobiel) zitten?
De mobiele fase is een gas of een vloeistof en de stationaire fase is een vloeistof of een vaste stof. De stationaire fase kan dan als vloeistof op een inerte korrel of poeder zitten. Deze kan in een kolom zitten of in dunne laag op een drager.
Waarvoor staat HPLC en wat houdt het in?
High performance liquid chromatography. vloeistofchromatografie in een gesloten kolom onder hoge druk.
Welk type HPLC hebben we in het labo uitgevoerd en wat hield dat in?
Reverse Phase HPLC. Een vloeibare apolaire stationaire fase wordt gebruikt, en een vloeibare polaire fase.
Waarom is de hoge druk nodig?
Tijd, grote diameter nodig.
Waaruit bestaat een HPLC systeem?
Vloeistofvoorzieningssysteem (Solvent en pomp) Injectiesysteem (injecteert sample) Kolom Detector Recorder Afvalbeker
Hoe werkt een HPLC injector?
Teken.
een RVS ring met 6 poorten. Hiervan gaat er 1 naar de kolom, 1 naar een afvalbeker en 1 vormt een lus. Op de ring zit een kegel met 3 inkepingen. Deze kan kan draaien zodat we LOAD en INJECT hebben.
In positie 1 (LOAD) zal het eluens rechtstreeks naar de kolom gaan (eluens is het solvent dat het staal meeneemt). Het monster zal dan door de lus naar de afvalbeker gaan. Dit gaat over enkele microliters.
Als we dan de stand op INJECT draaien dan zit een vaste hoeveelheid staal in de lus. in de INJECT stand is de eluens-ingang verbonden met de lus en de uitgang van de lus is verbonden met de kolom. Hierdoor zal het staal dat aanwezig was in de lus door de kolom gaan.
Waaruit bestaat de kolom
Meestal RVS.
Binnenin hebben we de apolaire stationaire fase (chemisch gebonden aan een silicakorrel omdat dit inert is).
Wat is een veelgebruikte vorm van stationaire fase?
(Si)_n – O – (Si)R_3
Met R = C_2, C_8 of C_18
Welke detectoren kunnen gebruikt worden, wat is een vereiste?
Grote gevoeligheid.
UV-VIS (constant of variabele golflengte) fluorescentiedetector Brekingsdetector Elektrochemische detector Massaspectrometer
Welke methode wordt meestal gebruikt voor kwantitatieve HPLC?
Inwendige standaard.
Wat is inwendige standaard?
Aan de ijkmonsters wordt eenzelfde hoeveelheid van een bepaalde stof toegevoegd. Deze stof is de inwendige standaard. Deze wordt op compleet dezelfde manier behandeld als de te meten stalen. Dit helpt ons onnauwkeurigheden en dergelijken te registreren.
Wat zijn de fouten die we met inwendige standaard kunnen wegwerken of verminderen? En hoe?
Onnauwkeurigheden bij het maken van de standaardoplossingen
Variaties van het injectievolume of temperatuur van de kolom
Drift van het detectorsignaal (zowel bij de te
bepalen component als bij de inwendige standaard)
We kunnen verhouding van de te bepalen component en de inwendige standaard nemen. Wat automatisch deze fouten wegwerkt.
Wat zijn de voorwaarden voor de inwendige standaard?
- Signaal moet ongeveer even groot zijn als dat van het te bepalen component.
- Chromatografisch gedrag en detectie moeten gelijklopend zijn met die van de te bepalen component. MAAR ze mag niet interfereren. Dus de retentietijd mag niet hetzelfde zijn maar ook niet te veel verschillen.
Wat is het nadeel van een inwendige standaard?
Niet altijd makkelijk om een goede inwendige standaard te vinden.
