Chapitre 31 - Séparations

Question 1

quels sont les objectifs de la chromatographie?

Answer 1

Simplifier des mélanges complexes, purification, isolation de molécules d’intérêts (car en petites quantité), Débarrasser des interférences.

Question 2

Qu’est-ce qui détermine l’étendue de la séparation?

Answer 2

la nature et l’importance des interactions entre les constituants des mélanges, la phase mobile et la phase solide.

Question 3

Expliquer le fonctionnement d’une LC classique sur colonne

Answer 3

1. Échantillon sur dessus et puis solvant introduit
2. Les composantes se déplace à vitesses différentes en fonction de leur affinité pour la phase stationnaire
3. Fractions récupérées
4. Solvant évaporer les substances purifiées - étude quanti ou quali.

Question 4

Décrire les distinctions de la LC moderne

Answer 4

Introduction: auto-échantillonneur
Mouvement solvant: pompes mécaniques
Colonne et sorbant: cylindre métallique
Détection: En ligne via différentes méthodes
Analyse: automatique du chromatogramme (par ordinateur)

Question 5

Quelles sont les différentes composantes d’une LC moderne?

Answer 5

Réservoir à solvant, pompe, échantillon, valve d’injection, colonne, détecteur

Question 6

Qu’est-ce qu’un chromatogramme?

Answer 6

courbe montrant la variation du signal du détecteur en fonction du temps de la séparation par chromatographie.

Question 7

Quels interactions moléculaires sont à la base d’une RPLC?

Answer 7

Interactions de dispersion (London): déformation du nuage électronique et formation d’un dipôle instantanné; grande molécule tendance à s’agglomérée ensemble.

Question 8

Quels sont les 3 interactions qui contrôle le passage du soluté à travers la colonne?

Answer 8

Phase mobile - soluté
Phase stationnaire - soluté
Phase mobile - phase stationnaire

Question 9

Définir temps de rétention (Tr)

Answer 9

Temps qu’un composé prend pour se rendre au détecteur. Entre l’injection de l’échantillon et le maximum pic d’élution

Question 10

définir temps mort (To)

Answer 10

temps minimum nécessaire pour que la phase mobile non retenu se rende au détecteur

Question 11

Définir temps de rétention ajusté (T’r)

Answer 11

Le temps que l’analyte est retenue dans la colonne

T’r = Tr - To

Question 12

A quoi est dû les différences de temps de rétention?

Answer 12

Aux interactions de l’analyte avec la phase stationnaire

Question 13

Pourquoi le coefficient de sélectivité de 2 composés à séparer doit être différente de 1?

Answer 13

Car si coefficient est égale à 1, cela signifie qu’ils ont les même temps de rétention donc les 2 composés vont sortir en même temps = pas de séparation

Question 14

Définir volume mort (Vo)

Answer 14

Volume inerte du système chromatographique occupé par la phase mobile, incluant le volume à l’intérieur et à l’extérieur des particules de la colonne

Question 15

3 caractéristiques d’un chromatogramme?

Answer 15

1. solutés séparés sont observés sous forme de pic
2. L’aire sous la courbe des pics est proportionnelle à la concentration de chaque soluté
3. Les pics qui sortent en 2e sont moins retenus que ceux qui sortent en dernier

Question 16

Qu’est-ce que l’efficacité d’une colonne chromatographique?

Answer 16

La capacité à fournir des pics étroits pour les solutés élués (efficacité de séparation).
Toujours par rapport au nombre de plateau théorique (N)
Plus N est grand, plus la colonne est efficace

Question 17

Quels facteurs affectent la pression dans une colonne?

Answer 17

augmentation de la pression pour augmenter la vitesse de séparation (UPLC meilleure séparation), largeur des particules (petites = haute pression), longueur de la colonne (plus longue = haute pression).

Question 18

quels sont les 2 facteurs principaux d’une chromatographie réussie?

Answer 18

1. Largeur des pic à la base (W); plus étroit = meilleur séparation
2. Différence entre les temps de rétention: pics doivent être séparés à la base.

Question 19

Qu’est-ce que la RPLC?

Answer 19

Phase stationnaire apolaire: C18

Phase mobile polaire: mélange eau et solvant organique miscible dans l’eau

Question 20

Pourquoi est-il important d’avoir de l’eau dans la phase mobile?

Answer 20

Car nous cherchons à avoir une bonne distribution entre la PS et PM. Un bon partage = 2 phases aux extrêmes
Si PM trop similaire à PS: k plus petit que 1 = mauvaise séparation.

Question 21

Comment contrôler la rétention?

Answer 21

Change le %B. une augmentation du %B mène à une diminution du temps de rétention de tous les composés et du temps d’analyse

Question 22

Comment modifier la sélectivité du système?

Answer 22

Modifie les temps de rétention

Question 23

Comment modifier la résolution du système?

Answer 23

Change le ratio eau/solvant (A/B)

Question 24

Qu’est-ce que le phénomène de diffusion?

Answer 24

Plus analyte passe de temps dans la colonne, plus il y a diffusion; la hauteur de la bande diminue mais l’aire sous la courbe reste la même.

Question 25

Quels sont les effets de la température?

Answer 25

Le Tr varie en fonction de la température, sont contrôle est donc important pour une bonne reproductibilité.

Question 26

Quelles sont les composante d’une HPLC?

Answer 26

Solvants, module de ctl manuel, dégasseur, pompe, injecteur, compartiment thermostaté pour la colonne, détecteur (UV , FLD)

Question 27

Distinguer élution isocratique vs par gradient

Answer 27

Isocratique: %B identifique tout au long de l’élution
Par gradient: composition PM modifier en fonction du temps (de faible à élevée).
Ceci permet de raccourcir le temps de séparation

Question 28

Qu’est-ce que le temps d’équilibrage (Te)?

Answer 28

Temps pour que la colonne retrouve un %B identique à celui au début de l’analyse
Généralement = 10 x To

Question 29

Quelles sont les propriétés les plus importantes lors du choix d’un tampon?

Answer 29

Pka et pouvoir tampon, solubilité dans les 2 phases, volatilité, absorbance dans UV, stabilité, capacité à formé des pairs d’ions.

Question 30

Quel est le but d’une séparation chromatographique?

Answer 30

obtenir la séparation la plus rapide possible permettant une séparation adéquates des pics des analytes.

Question 31

Quoi faire lors d’une faible rétention d’un composé polaire?

Answer 31

Si les solutés se trouvent sous la forme d’ions; utiliser des agents d’appariement

Question 32

Quoi faire si il y a des pics non-observables?

Answer 32

absence de pic est souvent dû au manque de sensibilité du détecteur ou du chevauchement avec des pics de signal élevée (utiliser un détecteur plus sensible ou sélectif).

Question 33

Quel est l’effet de la masse de l’échantillon?

Answer 33

Si elle est trop grande = cause une surcharge de la colonne. Ceci sature les sites de sorptions