Chapitre 3 Flashcards
Qu’est ce qu’un replicon?
L’unité d’ADN où se produit la réplication
-les plasmides
Les chromosomes bactériens
-les ADN des bacteriophages
Le clonage moléculaire implique la formation à l’extérieur de la cellule d’un ADN ………………….
D’un ADN recombiné
Définit ce qu’est un ADN recombinants
Ensemble formé par un vecteur/ fragment insérer
Qu’est-ce qu’un clone bactérien ?
Une colonie qui contient une population très importante d!insert identique. Bactérie recombinante qui c’est multiplié
Nommez les type d’ADN donneurs
- ADN génomique
- ADN complémentaire
- ADN obtenue par synthèse chimique
Nommez les étapes de la construction d’un ADN
- Choisi le type d’ADN donneur
- Couper l’ADN donneur et le vecteur- enzyme de la restriction
- Relier ADN- vecteur
- Amplifier chaque ADN recombinant
Qu’est-ce qu’un brins d’ADN comprend?
Des introns et des Exxon’s
Qu’est-ce qu’un enzyme de restriction?
Ciseau moléculaire de 4 à 6 nucléotides
Qu’est-ce qu’un exon?
Les parties codantes de l’ADN, ce qui va être transcrit en ARNm pour produire des protéines
Pourquoi utiliser l’ADNc au lieu de l’ADN génomique?
Car l’ADNc comprend seulement les exon’s et on s’intéresse juste au exon’s, les bactéries ne peuvent pas prendre les introns
Dans quelle situation utiliserait on un enzyme de restriction de 4 nucléotides vs 6 nucléotides?
4 nucléotides— > dans un gros génome
6 nucléotides —> dans un petit génome
Extrémité franches vs extrémité cohésive?
Franche = coupure égale Cohesive = coupures décalées
Comment l’ADN recombinant est-il amplifier in vivo?
L’ADN recombinent entre dans la bactérie par transformation, ensuite le vecteur plasmidique va se cloner.
Nomme les différents vecteurs de clonage
- Plasmidiques
- Virus
- Cosmides
- vecteur a large capacité
- Vecteur d’expression
Comment agissent les vecteur plasmidiques?
Capable de se répliquer indépendamment,clone des fragments d’au plus -30 kB
Vecteur à large capacité
BAC ; 300Kb, YAC;400 kB
Qu’est-ce qu’une bande d’ADN
L’ensemble des clones obtenus à partir d’un seul échantillon d’ADN
Qu’est-ce que la banque génomique
Couvre l’ensemble du génome
Que comprend l’ADNc
Comprend juste les Exxon’s , uniquement les parties transcrites du génome
Qu’est-ce que la banque d’expression
Permet à n’importe quel insert clonée produire l’ARNm et protéines.
Peut prendre l’ADN génomique ou ADNc
Qu’est-ce que la complémentation fonctionnelle permet de faire?
Permet de détecter des clones spécifiques. Capacité de restaurer la fonction éliminer par les mutations récessives
Étapes de la complémentation fonctionnelle
- Construire une banque bactérienne qui contient des insert de l’ADN donneur recombinant de type sauvage
- Transformer les cellules mutantes a- avec l’ADN cloné des donneurs
- Identifier les clones qui produisent des cellules avec le phénotype a +
- Récupérer le gène a +
Qu’est-ce qu’on peut faire avec le gène isolé sous forme de clone? ADN recombinant
- Déterminer la séquence -technique de sequencage
- Étudier les propriétés du gène en le mutant et l’introduisant dans son hôte
- Utiliser comme sonde pour cartographier ou diagnostic génétique
- Former un organisme transgénique (OGM)
De quel sens va le brin qu’on li à partir du gel de séquencage?
5’ —->3’. Le brin matrice (d’origine) va donc être sa séquence complémentaire (3’—->5’)
Qu’est ce qu’un organisme transgénétique?
Contient un transgène ( gène transféré
Vrai ou faux, le Y chez la drosophile spécifie le caractère mâle.
Faux, il ne le spécifie pas .
Quelle progéniture donne habituellement le croisement entre une femmelle aux yeux blanc X mâle aux yeux rouges?
1 femelle yeux rouges: 1 mâle yeux blanc
Que peut-on retrouver dans la progéniture du croisement entre une femelle au yeux blanc X mâle aux yeux rouges?
Il arrive de retrouver des mâles yeux rouges et des femelles yeux blanc dû a la non-disjonction des chromosomes homologues lors de la méiose.
Si le chromosome Y n’a rien à voir avec le sexe de la progéniture, comment est déterminé le sexe chez la drosophile?
Il est déterminé par le rapport du nombre de chromosomesX sur le nombre de compléments d’autosomes (laploïde)
Quelles sont les maladies à extension de triplet? 2 vue dans le cours
Le syndrome de l’X fragile
Maladie de Huntington
Les maladies à en expansion de triplets
Au départ les triplets se retrouvent où.
Se retrouvent soit dans les régions non codantes 5’ UTR , 3’ UTR ou introns
Les maladies à expansion de triplets sont du a quoi?
Elles sont dues à une expansion du nombre de triplets au delà d’un seuil.
La maladie de Huntington est un cas de dominance pure pourquoi?
Car l’heterozygote et l’homozygote muté semblent avoir le même phénotype. Il s’agit donc d’une mutation de gain de fonction.
Le clonage moléculaire est avant tout une méthode puissante et efficace pour ?
Purifier l’ADN et purifier les gènes
Qu’est-ce qu’une cellule merodiploide
Une cellule qui est diploïde pour une partie du chromosome
Comment peut-on répliquer de l’ADN étranger chez E.coli
Pour permettre le clonage moléculaire, il faut que l’ADN soit intégré avant de pénétrer dans la cellule dans un replicon
Qu’est-ce que le clonage moléculaire implique?
Il implique la formation d’un adn recombiné à l’extérieur de la cellule.
Quelle est l’expérience de Cohen et coll?
L’insertion d’un fragment d’ADN dans un plasmide.
Qu’est-ce qu’un clone moléculaire?
C’est un ensemble de molécules d’ADN toutes dérivées d’une seule par un processus de reproduction asexuée.
Quels son5 les 3 types de clones moléculaire?
Le fragment cloné (l’insertion) est un clone. La colonie microbiologique . L’ensemble de molécules du plasmide recombinant est un clone
La méthode de Sanger est utilisé pour séquencer …..
Pour séquencer des gènes individuels (grande précision de lecture)
Nommez les 4 stratégies historiques pour isoler un gène lorsque la protéine est connue.
- Cloner un plasmide ou l’ADNc à l’ARNm du gène d’intérêt et on identifie les clones par hybridation grâce à 7ne sonde marquée ou une méthode immunologique.
- Cloner l’ADN génomique comportant le gène d’intérêt et on se sert de l’ADNc comme sonde.
- Sous-cloner chez un plasmide l’ADN génomique ou une partie.
- Se servir des séquences clonées pour fin d’analyse ou de synthèse.
