Chapitre 2 - Observations Microscopiques Flashcards
Quelles sont les sortes de microscopie?
Photonique et électronique
Quelles sont les sortes de microscopie photonique?
- à fond clair
- à fond noir
- à contraste de phase
- à interférence différentielle
- à fluorescence
Quelles sont les sortes de microscopie électronique?
- à transmission
- à balayage
Pourquoi la microscopie à fond clair nécessite souvent une coloration (et donc une fixation —> organisme mort)
Pour augmenter le contraste
Pourquoi ne faut-il pas nécessairement faire une coloration lors d’une microscopie à fond noir (ø fixation = microorganismes vivant)
Parce que le microorganisme est clair sur un fond sombre (bon contraste)
Sans qu’on est besoin de faire FIXATION NI COLORATION, que peut-on observer grâce au microscope à contraste de phase?
Les structures fines, car on joue seulement sur l’intensité lumineuse
Qui a-t-il de spécial sur une image de microscopie à contraste de phase?
Un HALO DE PHASE autour des structures
Comment fonctionne un microscope à contraste de phase?
La lumière en phase qui traverse une structure cellulaire va ressortir déphasée (intensité lumière moins grande)
Comment fonctionne un microscope à contraste d’interférence différentielle?
Produit une image en détectant les différences d’indice de réfraction et d’épaisseur
Comment a l’air une image de microscopie à contraste d’interférence différentielle?
Et quelle sont les limitations?
- Permet de voir les structures fines
- donne un pseudo relief 3D
Limite: la préparation doit être transparente
Comment fonctionne un microscope à fluorescence?
Coloration fluorescente avec des fluorochrome
Échantillon absorbe
UV —> émet lumière visible
Comment fonctionne l’immunofluorescence?
Couplage chimique entre anticorps et fluorochromes.
Capable de voir où les anticorps s’attachent sur une bactérie
Quelle sorte de microscope peut permettre d’observer des virus?
Microscopes électroniques
Quelle est le grossissement max d’un microscope photonique?
2000x
Quelle est le grossissement d’un microscope électronique?
400 000X
Quelle est la limite de résolution d’un microscope photonique?
100 nm
Quelle est la limite de résolution d’un microscope électronique?
0.1 nm
Qu’est-ce qui explique la différence de limite de résolution entre le microscope photonique et le microscope électronique?
La longueur d’onde des électrons est plus petite que celle des photons
Pourquoi le microscope électronique peut avoir un plus gros grossissement que le photonique?
À cause du limite de résolution plus faible que le photonique
Pourquoi faut-il faire une «coloration» / préparation de métal à des échantillons avant des les observer au microscope électronique?
Parce que la matière organique n’absorbe pas les électrons, alors on verrait rien
Métal va absorber les électrons
Quelle est le principe d’une image négative?
Et donne un exemple d’utilisation
C’est une image dont les couleurs d’origine sont inversées.
Ex: dans une microscopie électronique à transmission préparée avec la technique d’ombrage, une image positive aurait les structures en foncé et les ombres en clair
En mettant l’image négative, les ombres sont foncées et les structures claires
Quelles sont les techniques de «coloration» pour la microscopie électronique?
Et décrit les
1-technique d’ombrage:
On émet un jet de métal à 45° sur l’échantillon. Ça permet de voir les reliefs. On met aussi une petite bille de taille connue pour faire une échelle de comparaison avec les structures cellulaires.
2- technique de coloration négative
On met de l’acide phosphothungstique (qui absorbe les électrons). L’acide s’accumule dans les creux. Alors, creux foncé et protubérance claires.
Donne une impression de reliefs 3D
3-cryodécapage
Gèle l’échantillon, coupe transversale.
Couplé avec technique d’ombrage, permet de voir bien les structures internes de la cellule
4-immuno-localisation cellulaire
Couple anticorps spécifique à une protéine ou structure et bille de métal pour localiser où sont les structures/protéines
Quelles sont les sortes de microscopie électronique?
- à transmission
- à balayage
Comment fonctionne un microscope électronique à transmission?
Les électrons traversent l’échantillon et sont recueillis par un détecteur sous l’échantillon.
L’image est traitée par un ordinateur
Pour le microscope électronique à transmission, quelle genre d’image obtient-on?
Une image par transparence
Comment fonctionne un microscope à balayage?
Il y a BALAYAGE de l’échantillon avec un faisceau d’électrons. Les capteurs sont latéraux, et non sous l’échantillon.
Pour le microscope électronique à balayage, quelle sorte d’image obtient-on?
Un effet de 3D
