Chapitre 1 : la cellule Flashcards
caractéristique des archébactéries ?
1) Certaines bactéries méthanogènes ou thermophiles
2) bien que de la famille des procaryotes, possèdent certaines caractéristiques biochimiques propres aux eucaryotes comme :
- réplication
- transcription et traduction
- histones
- introns
Les virus est ce que vivant ?
position unique entre vivant et non vivant
comment s’appelle un virus de bactérie ?
phages
matériel génétique du virus
ADN OU ARN
Les cellules eucaryotes animales possèdent une organisation….
microscopique générale commune
Différence cellules eucaryotes et procaryotes ?
- cellule eucaryote 1000 fois plus large en volume que cellule procaryote
- cellule eucaryote possède un cytosquelette, un noyau avec membrane nucléaire double + organites
- cellule eucaryote ne possèden pas de paroi cellulaire contrairement à procaryotes.
Comment sont apparu les eucaryotes ?
cellule procaryote primordial prédatrice qui capturait d’autres cellules comme mitochondries
- elle avait une membrane cellulaire souple et un cytoplasme complexe capable de faire bouger cette membrane pour gobber)
Des cellules eucaryotes sans le problème du développement multicellulaire (sert de modèle cellulaire eucaryote) et pourquoi ?
saccharomyces cerevisiae (levure de boulanger)
Pourquoi ? se reproduit par voie végétative (simple division-forme diploide) ou sexués (méiose-forme haploide) et génome très petit !
les 4 modèles d’organisme pour les études en biologie + bonus embryologie
1- le ver nématode
2- la mouche Drosophila melanogaster
3- la souris Mus musculus
4- l’Homo sapiens (séquençage du génome)
En embryologie : aussi la grenouille Xenopus laevis et le zebrafish
Pourquoi isoler une cellule ?
pour caractériser de façon biochimique les composés de la cellules, tester des drogues, étudier la fonction des gènes par transfection
Comment isoler protéines abandontes ?
1- récupérer directement d’un tissu qui contient bcp de protéines recherchées
2-après amplification en culture primaire (sans autres purifications)
Comment isoler des cellules ? abondante ou rare
Défaire la matrice extracellulaire et jonctions intercellullaires chimique (enzyme + EDTA) et physique
si cellule rares, il sera nécessaire de faire un enrichissement supplémentaire d’un type cellulaire.
Comment enrichir une cellule rare (2)
Isolement de cellules au FACS
Purification à l’aide d’un aimant et de billes magnétiques
Comment fonctionne le FACS
échantillons passe à travers un laser. cellule fluorescentes au passage du laser vont devenir chargées négativement puis déviés par un chamos électrique
Comment fonctionne la purification avec des billes magnétiques ?
deux type : sélection négative et sélection positive.
Dans la sélection positive : l’anticoprs se lie à la cellule indésirés et les billes magnétiques se lient à l’anticorps) c’est le contraire pour sélection positive - cellule désiré se lie à l’anticorps
À quoi sert les cultures cellulaire ?
Utiles pour manipulations génétiques et pour tester différentes substances
Culture primaires ? culture secondaire ?
Culture primaire : Culture de cellules isolées directement du tissus. on va les décoller lorsqu’elles arrive à confluence avec de la tripsine puis on va les diluer recultiver à confluence (culture secondaire)
À la culture secondaire : semaines à quelques moi sur même échantillon - conservent beaucoup les propriétés du tissu d’origine
Problème avec cultures primaire et secondaire ?
cellules vont dégénéré et mourir
Pourquoi cellules cultures primaires et secondaires meurt ?
car racourcissement des télomères et choc de culture (méchanisme de contrôle pète les cable
Comment déjouer problème de mort des cellules en cultures primaire et secondaire
immortaliser les cellules
Comment immortaliser les cellules (4)
1- en réintroduisant les télomérases
2- en inactivant les contrôles du cycle cellulaire
3- avec des produits chimiques
4- le choc de culture peu-être éviter suite à une mutation durant la culture
C’est quoi une cellule transformée?
cellules dérivés de tumeurs, produites en introduisant des oncogènes ou infectées par des virus oncogéniques
Propriétés des cellules transformées
immortelles, prolifèrent à haute densité, pas besoin d’être attacher pour pousser, produisent des tumeurs lorsqu’injectées dans des souris.
est ce que cellules transfrormées et immortelles sont les mêmes cellules ?
non,mode de création différente
définition de la transfection
la transfection = insertion d’un acide nucléique (ADN ou ARN) dans une cellules animales en utilisant des méthodes chimiques, physique ou biologiques (virus).
À quoi sert la transfection?
-étudier la fonction et la régulation des gènes
-produire des organismes transgéniques
efficacité constantes chez les types cellulaire ?
non, l’efficacité va varier en fonction des types cellulaires et de la méthode de transfection
quelles cellules sont plus difficiles à transfecter ?
les cellules primaires sont en générale plus difficiles à transfecter
explication méthode de transfection chimique
faire rentrer dans une cellule chargée négativement des molécules chargées négativement (adn et arn) en neutralisant la charge ou charger positivement en le complexant avec du calcium phosphate ou des polycations. ou des lipides pour former liposomes (rentrer par endocytose ou fusion avec la membrane plasmique)
explication méthode de transfection physique
microinjection dans les cellules souches embryonnaires (ES) ou électroporation
transfection transitoire
1 - l’adn rentre dans la cellule
2 - le plasmide rentre dans le noyau ou le gène étudié sera transcrit puis traduit.
3 - expression élevée durant un temps limitée (expression max après 48-72h post transfection)
4- après max 8 jours, plasmide sera dégradé et diluéé lors des divisions cellulaires
quel adn rentre le plus facilement dans la cellule
l’ADN super-enroulé, car très compacte
transfection stable
transfection transitoire qui peut se solder par transfection stable soit intégration du plasmide (ex: gène de résistance) au génome de la cellule et transmis aux cellules filles après division cellulaire.
comment fonctionne la transfection stable avec gène de sélection et gène de résistance sur le même plasmide ou sur plasmide différent (co-transfection)
le plasmide transfecter contient un gène de sélection qui sélectionnent un groupe de cellules. ensuite parmi ce groupe, le gène de résistance va s’exprimer de façon transitoire ou à long terme selon la cellule. les cellules résistantes à long terme vont intégré le plasmide dans le génome qui sera transmis aux cellules filles
N.B : dans la co-transfection, même chose, mais on va augmenter la quantité de plasmide contenant le codage pour protéine étudié (ex : gène de résistance) pour augmenter la probabilité que les cellules sélectionnées contiennent les 2 plasmides
transduction
transfection en utilisant un vecteur viral
Méthode biologique de transfection
Plus efficace que les méthodes chimiques/physiques utilisant de virus recombinant comme ADV, AAV, RV et LV
Quel virus ne peut être transfecté une vitro ?
le virus AAV, car il ne s’intègre pas au génome de la cellule
quels virus ont des transfections stable et très efficace ?
RV et LV
