chap. 10 Flashcards
La recombinaison in vivo
dans des cellules bactériennes vivantes
ADN recombinant
ensemble formé par un vecteur/fragment insérer.
Qu’est-ce qu’un clone bactérien?
un colonie qui contient une population très importantes d’insert identique. Bactérie recombinante qui ces multiplier
Nommer les types d’ADN donneurs
- ADN génomique
- ADN complémentaire
- ADN obtenue par synthèse chimique
Nommer les étapes de la construction d’un ADN recombinant.
- choisir le type d’ADN donneur
- couper l’ADN donneur et le vecteur - enzyme de restriction
- relier ADN-vecteur
- amplifier chaque ADN recombinant
Qu’est-ce qu’un enzyme de restriction?
ciseau moléculaire de 4à6 nuctléotides
qu’est-ce qu’un brins d’ADN comprend?
des introns et des exons
qu’est-ce qu’un exon ?
les parties codantes de l’ADN, ce qui va être transcrip en ARNm pour produire des protéines
Pourquoi utuliserait-on l’ADNc aulieux de l’ADN génomique?
car l’ADNc comprend seulement les exons et on s’interesse juste au exons, les bactéries ne peuvent aussi pas prendre les introns
Dans quel situation utiliserait-on un enzyme de restriction de 4 nucléotides vs. 6 nucléotides?
4 - dans un gros génome
6 - dans un petit génome
extrémité franche vs. extrémité cohésive.
franche = coupure égale cohésif = coupure décaler
Former un plasmide d’ADN chimérique
bout collant - cohésif doivent se coller ensemble avec enzyme ligase - liaison phosphodiesters
Comment l’ADN recombinant est-il amplifier in vivo
l’ADN recombinant entre dans la bactérie par transformation, ensuite le vecteur plasmidique va se cloner
Nomme les différents choix de vecteurs de clonage
- plasmidique
- virus
- cosmides
- vecteurs à large capacité
- vecteurs d’expression
les vecteurs plasmidique
capable de se repliquer indépendament
clone des fragments d’au plus - 30kb
les vecteurs viraux
efficacité d’infection de virus élevé = gène cloner peut être introduit d’une fréquence élevé. fragments de taille définie.
les cosmides
vecteur constituer d’un plasmide et du phage lambda.
fragment d’au plus - 45kb
vecteurs à large capacité
BAC ; 300kb, YAC ; 400kb
vecteur d’expression
permet le clonage ET l’expression
Qu’est-ce qu’une bande d’ADN?
l’ensemble des clones obtenue a partir d’un seul échantillon d’ADN
banque génomique
couvre l’ensemble du génome