chap. 10 Flashcards

1
Q

La recombinaison in vivo

A

dans des cellules bactériennes vivantes

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Q

ADN recombinant

A

ensemble formé par un vecteur/fragment insérer.

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3
Q

Qu’est-ce qu’un clone bactérien?

A

un colonie qui contient une population très importantes d’insert identique. Bactérie recombinante qui ces multiplier

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4
Q

Nommer les types d’ADN donneurs

A
  1. ADN génomique
  2. ADN complémentaire
  3. ADN obtenue par synthèse chimique
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Q

Nommer les étapes de la construction d’un ADN recombinant.

A
  1. choisir le type d’ADN donneur
  2. couper l’ADN donneur et le vecteur - enzyme de restriction
  3. relier ADN-vecteur
  4. amplifier chaque ADN recombinant
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6
Q

Qu’est-ce qu’un enzyme de restriction?

A

ciseau moléculaire de 4à6 nuctléotides

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7
Q

qu’est-ce qu’un brins d’ADN comprend?

A

des introns et des exons

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8
Q

qu’est-ce qu’un exon ?

A

les parties codantes de l’ADN, ce qui va être transcrip en ARNm pour produire des protéines

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9
Q

Pourquoi utuliserait-on l’ADNc aulieux de l’ADN génomique?

A

car l’ADNc comprend seulement les exons et on s’interesse juste au exons, les bactéries ne peuvent aussi pas prendre les introns

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10
Q

Dans quel situation utiliserait-on un enzyme de restriction de 4 nucléotides vs. 6 nucléotides?

A

4 - dans un gros génome

6 - dans un petit génome

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11
Q

extrémité franche vs. extrémité cohésive.

A
franche = coupure égale
cohésif = coupure décaler
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12
Q

Former un plasmide d’ADN chimérique

A

bout collant - cohésif doivent se coller ensemble avec enzyme ligase - liaison phosphodiesters

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13
Q

Comment l’ADN recombinant est-il amplifier in vivo

A

l’ADN recombinant entre dans la bactérie par transformation, ensuite le vecteur plasmidique va se cloner

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14
Q

Nomme les différents choix de vecteurs de clonage

A
  1. plasmidique
  2. virus
  3. cosmides
  4. vecteurs à large capacité
  5. vecteurs d’expression
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15
Q

les vecteurs plasmidique

A

capable de se repliquer indépendament

clone des fragments d’au plus - 30kb

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16
Q

les vecteurs viraux

A

efficacité d’infection de virus élevé = gène cloner peut être introduit d’une fréquence élevé. fragments de taille définie.

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17
Q

les cosmides

A

vecteur constituer d’un plasmide et du phage lambda.

fragment d’au plus - 45kb

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18
Q

vecteurs à large capacité

A

BAC ; 300kb, YAC ; 400kb

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19
Q

vecteur d’expression

A

permet le clonage ET l’expression

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20
Q

Qu’est-ce qu’une bande d’ADN?

A

l’ensemble des clones obtenue a partir d’un seul échantillon d’ADN

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21
Q

banque génomique

A

couvre l’ensemble du génome

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22
Q

banque ADN complémentaire

A

comprend juste les exons - uniquement les parties transcriptes du génome

23
Q

banque d’expression

A

permet a n’importe quel insert cloné de produire ARNm et proteine.
peut prendre ADN génomique ou ADNc.

24
Q

Comment trouver les clones à l’aide d’une sonde?

A
  • sonde qui reconnait un séquence d’ADN spécifique

- sonde qui reconnait une protéine spécifique

25
Q

sonde qui reconnait une séquence d’ADN

A

technique de southern

sonde simple brin introduit dans l’ADN et va trouver sa séquence complémentaire

26
Q

sonde qui reconnait une protéine

A

technique de northen
vecteur d’expressions (fait par ADNc), développement d’un anticorps qui va identifier le clone qui contient le gène qui a synthétiser la proteine.

27
Q

technique de southern

A

pour ADN - sonde reconnair ADN

28
Q

technique de northen

A

pour ARN - sonde reconnait protéine

29
Q

pourquoi utilise-t-on les techniques de transfert de southern/northen?

A
  • voir si l’individu est porteur d’un gène ou de l’allèle qui à été cloner
  • Déterminer si le gène est exprimer.
30
Q

Qu’est-ce que la complémentation fonctionnelle permet de faire?

A

permet de détecter des clones spécifique - capacité de restaurer la fonction éliminer par les mutation recessives

31
Q

étapes de la complémentation fonctionnelle

A
  1. construire banque bactérienne qui contient des insert d’ADN donneur recombinant de type sauvage
  2. transformer les cellules mutantes a- avec l’ADN cloner des doneur
  3. identifier les clones qui produisent des cellules avec le phénotype a+
  4. récuperer le gène a+
32
Q

amplification in vitro

A

PCR

33
Q

étapes de la PCR

A
  1. dénaturation - 95 degré. sépare les deux brins d’ADN
  2. hybridation - 50-65 degré. les amorces s’hybrident à leur séquence complémentaire
  3. élongation - 72 degré. extension des amorces par Taq polymérase
34
Q

Que doit-on avoir pour utiliser la PCR

A

on doit connaitre une partie de la séquence du gène/du fragment

35
Q

Qu’est-ce qu’on peut faire avec le gène isolé sous forme de clone? (ADN recombinant)

A
  1. déterminer la séquence - technique de séquencage
  2. étudier les propriété du gène en le mutant et l’introduisant dans son hôte
  3. utiliser comme sonde pour cartographier ou diagnostique génétique
  4. former un organisme transgénétique (OGM)
36
Q

La technique de séquençage

A

utilisation de didésoxynucléotides (contient pas de groupement OH). les ddNTP vont bloquer la synthèse de l’ADN

37
Q

de quel sens va le brin qu’on li appartir du gel de séquençage?

A

5’ –> 3’. le brin matrice (d’orignie) va donc être sa séquence complémentaire (3’ –> 5’)

38
Q

séquenceur automatisés

A

les didésoxynucléotides sont marqués par un fluorophore. permet d’intensifier les séquençages

39
Q

organisme transgénétique

A

contient un transgène (gène transféré)

40
Q

baculovirus des insects

A

vecteur pour protéine eucaryote

gène insérer dans baculovirus et exprimer a des fréquences élevés.

41
Q

comment insère-t-on le transgène dans le baculovirus?

A

à l’aide de phages

42
Q

qu’est-ce que l’ADN étranger fait une fois a l’intérieur d’une autre cellule?

A
  1. remplace un gène

2. insertion ectopique

43
Q

insertion ectopique

A

s’insère n’importe où dans le génome

44
Q

gène rapporteur

A

gène de résistance aux antibiotiques

45
Q

comment sait-on si le gène a remplacer un autre ou à fait une insertion ectopique?

A

on met le gène en question et un gène rapporteur sous le contrôle d’un promoteur. gène rapporteur signale les endroits/moments ou le gène étudier est actif

46
Q

Qu’utilise-t-on pour produire des plantes transgénétique?

A

le plasmide Ti.

47
Q

Qu’est-ce que le plasmide Ti?

A

vecteur pour former plante transgénétique. dérvier d’une bactérie qui développe la gale du collet. induit un tumeur

48
Q

ADN-t

A

region du plasmide qui s’insert dans la plante hote

49
Q

la thérapie génétique

A

gène fonctionnel introduit pout remplacé un gène déficient.

50
Q

les deux type de thérapie génétique

A
  1. germinale

2. somatique

51
Q

thérapie génétique germinale

A

transmit au descendant

52
Q

thérapie génétique somatique

A

pas transmit au descendant, dans les cellules somatique

53
Q

Comment detecter les allèles responsables de maladies?

A
  1. transfert de southern - voir si l’ADN contient la séquence de type sauvage ou mutante
  2. PCR - isole l’ADN et l’amplifie.