Calcium signaling

Question 1

Warum wird [Ca2+] intrazellulär niedriger gehalten als in der ECM?

Answer 1

Funktion als Botenstoff erfordert niedrige zytoplasmatische Konzentrationen. -> Anstieg der Konz. führt zu Signalwirkung -> wird andernfalls mit Calciumpumpen und calciumbindenden Proteinen niedrig gehalten.

Question 2

Wovon hängt die Kalziumdissoziationskonstante ab?

Answer 2

pH-Wert, Temperatur, Konzentration des PBS-Puffers (Ionenstärke)

Question 3

Was ist Fura-2?

Answer 3

Calciumindikator, dessen Fluoreszenzexcitationsmaximum sich bei der Bindung an Calcium verschiebt

Question 4

Was ist EGTA, wofür wird es verändert?

Answer 4

Ein Calciumchelator als Calciumpuffer zum Erreichen nanomolarer [Ca2+]

Question 5

Welche Aufgaben hat Calcium in der Zelle?

Answer 5

Second messenger (Botenstoff) -> Regulation von Zellprozessen: Kontraktion der Muskelzelle, Sekretion von Neurotransmittern in Synapsen, Regulation der Genexpression, gerichteter Zelltod, Fusion der Zellkern bei Meiose, Proliferation von Krebszellen

Question 6

Woher kommen HEK293-Zellen?

Answer 6

Epithelzellen, Zelllinie gewonnen aus der Niere eines humanen Fötus, mit Adenovirus-DNA-Fragmenten transfiziert und dadurch immortalisiert. Dienen der Untersuchung von Fremdproteinen oder Wirtssystem für Viren

Question 7

Fluoreszenz?

Answer 7

Emission von Licht bei Übergang von S1 zu S0. Energieärmer durch vorherige Schwingungsrelaxation. Rotverschiebung

Question 8

Emissionsspektrum?

Answer 8

Messung der Intensität der Emissionswellenlängen bei einer bestimmten Excitationswellenlänge

Question 9

Excitationsspektrum?

Answer 9

Messung der Intensität der Emission bei verschiedenen Excitationswellenlängen

Question 10

Fluoreszenzmikroskor

Answer 10

Dichroitische Spiegel - am wichtigsten. reflektiert Licht kürzerer Wellenlänge und transmittiert solches längerer WL, wodurch die Fluoreszenz unabhängig von der Anregung betrachtet werden kann

Question 11

Isosbetischer Punkt?

Answer 11

beschreibt eineWL, bei der sich in einem System, in dem eine Reaktion stattfindet, die Lichtabsorption im Verlauf der Reaktion nicht ändert.

Question 12

Wo liegt der isosbetischer Punkt?

Answer 12

Bei 360nm, hier gute Anregung beider Formen

Question 13

Wo bindet Fura-2 an Calcium?

Answer 13

Zwischen 4 negativ geladenen Carboxylgruppen

Question 14

Was ist PBS?

Answer 14

phosphatgepufferte Salzlösung mit physiologischem pH-Wert, Osmolarität und Ionenstärke; entscheidend wegen starker Abhängigkeit der Dissoziationskonstante von diesen Parametern

Question 15

Klassen von fluoreszierenden Kalziumindikatoren?

Answer 15

Genetisch kodierbare Kalziumsensoren und chemisch entwickelte KS

Question 16

Beispiel von genetisch kodierbaren Kalziumindikatoren?

Answer 16

Aequorin, a. Victoria, Protein, das nach dem Binden von Kalzium luminisziert. Gezielte Markierung von bestimmten Kompartimenten

Question 17

Chemisch entwickelter Fluoreszenzfarbstoff?

Answer 17

Leichte und schnelle Handhabung bei der Beladung vom Zellen sowie die Vielzahl ihrer Varianten

Question 18

Ratiometrisch

Answer 18

Ratio-Verhältnis, Metrik-Messung. Eine unbekannte Größe kann aus dem Verhältnis mehrerer bekannter anderer Größen zueinander abgeleitet werden.

Question 19

Ratiometrischen Kalziumindikatoren

Answer 19

Nach der Bindung von Calcium kommt es nicht nur zur Veränderung der Fluoreszenzintensität sondern vor allem zur Verschiebung der bevorzugten Anregungs-oder Fluoreszenzwellenlängen.

Question 20

Chelator

Answer 20

Organische od selten anorg Verbindungen, die 2 oder mehr freie Elektronenpaare aufweisen und damit mehr als eine kooperative Bindung mit einem zentralen (metall-) ion eingehen können.
Damit fixieren sie zwei-oder mehrwertige Kationen in stabilen, ringförmigen Konformationen.