bmb Flashcards
Hvad er Fulvestrant?
Fulvestrant er en anti-østrogen terapi, der binder til østrogenreceptoren (ER) i stedet for østrogen. Når Fulvestrant binder til ER, medfører det en destabilisering af receptoren >Fulvestrant-ER-komplekset transporteres derefter ind i kernen, men i stedet for at aktivere gener, medfører det, at ER nedbrydes af proteasomer, hvilket forhindrer østrogen i at stimulere cellevækst.
Hvad er IL-6?
En transkriptionsfaktor, der aktiveres af cytokiner som IL-6 og regulerer cellevækst og overlevelse.
Hvordan fungerer IL-6/STAT3-signalvejen?
IL-6 aktiverer JAK2, som fosforylerer STAT3. STAT3 bevæger sig ind i cellekernen og regulerer genekspression, der fremmer cellevækst og overlevelse.
Hvilken rolle spiller IL-6/STAT3 i kræft?
Fremmer celleproliferation. (celledeling og vækst.)
Hæmmer apoptose.(celledød)
Øger metastase. (spredning af kræftceller fra det oprindelige tumorsted til andre dele af kroppen via blod eller lymfesystemet.)
Hvad var formålet med forsøget?
At isolere cellekerner, kvantificere proteinindhold med BCA-assay og analysere proteiner med Western Blot.
Hvad gør resuspensionsbuffer (RSB)?
Opretholder osmotisk balance og beskytter proteiner under isolation.
Hvad er formålet med IgePal-CA630 i lysisbufferen?
At permeabilisere plasmamembranen uden at ødelægge kernemembranen. (
Permeabilisere betyder at gøre en membran gennemtrængelig for visse stoffer eller molekyler, som normalt ikke kan passere igennem.)
Hvad opnås ved centrifugering under nukleus-isolation?
Separation af cellekerner i pelleten og cytoplasma i supernatanten.
Hvad er princippet bag BCA-assayet?
Proteiner reducerer Cu²⁺ til Cu⁺, som danner et farvet kompleks med BCA, der måles ved 562 nm.
hvordan bestemmes proteinindhold i en prøve ved BCA-assay?
Ved at sammenligne absorbansen af prøven med en standardkurve. < formel: (absorbans - b)/a -fortydning
Hvilke trin indgår i en Western Blot-protokol?
Prøveforberedelse, gel-elektroforese, membranoverførsel, blokering, antistofinkubation og detektion.
Hvad gør primære antistoffer i Western Blot?
Binder specifikt til målproteinet.
Hvad gør sekundære antistoffer i Western Blot?
Binder til primære antistoffer og muliggør visualisering.
Hvad er formålet med blokering i Western Blot?
At forhindre uspecifik binding af antistoffer til membranen.
Hvad betyder SDS i SDS-PAGE?
Sodium Dodecyl Sulfate, et detergent, der denaturerer proteiner og giver dem en negativ ladning.
Hvordan visualiseres proteiner i Western Blot?
Ved brug af kemiluminescerende substrater, der reagerer med sekundære antistoffer
Hvorfor anvendes Fulvestrant til østrogenreceptor-positiv brystkræft?
Fordi den hæmmer østrogenets evne til at stimulere kræftcellevækst.
Hvad sker der, når IL-6 binder til sin receptor?
JAK2 aktiveres, fosforylerer STAT3, som derefter regulerer genekspression i kernen.
Hvorfor er IL-6/STAT3 overaktiveret i kræft?
Overaktiveringen fremmer celleproliferation, hæmmer apoptose og øger metastase
Hvad er en potentiel fordel ved at hæmme IL-6/STAT3-signalvejen?
Det kan reducere kræftcellevækst og metastase.
Hvilke behandlinger blev testet i forsøget?
Fulvestrant
IL-6
Fulvestrant + IL-6
Kontrolgruppe
Hvilke proteiner blev undersøgt i forsøget, og hvorfor?
GAPDH: Housekeeping-protein i cytoplasma; forventes i alle cytoplasmaprøver.
Histone H3: Housekeeping-protein i kerner; forventes i alle kerneprøver.
ER (østrogenreceptor): Aktiverer genregulering og cellevækst; forventes i lave niveauer efter Fulvestrant-behandling.
STAT3: Transkriptionsfaktor; aktiveres af IL-6, forventes i prøver behandlet med IL-6
Hvad er formålet med Western Blot?
At identificere specifikke proteiner i en prøve.
Hvordan fungerer Western Blot?
1.Proteiner separeres via SDS-PAGE.
2.Overføres til en membran (nitrocellulose eller PVDF) ved elektrisk felt.
3.Blokeres for uspecifik binding.
4.Primært antistof binder til målproteinet.
5.Sekundært antistof forstærker signalet.
5.Visualisering sker med lys, farve eller fluorescens.
