Biotecnologia Flashcards
Qual a diferença de biotecnologia e engenharia genética?
Qual a primeira e principal ferramenta da engenharia genética, como ela funciona e pra que serve?
Fale sobre a DNA ligase.
Fale sobre os plasmídeos.
- Plasmídeo se replica independente da replicação da bactéria
- Há vários plasmídeos num célula
- Um plasmídeo é um vetor, transportador, carreador de genes que tenho interesse, ele leva o que eu quero para dentro da bactéria.
Quais as 4 finalidades da tecnologia do DNA recombinante?
- A finalidade:
- Criar transgênicos
- Clonar genes de interesse
- Síntese de substâncias de origem PROTEICA, a partir do gene de interesse.
- Hormônios, anticorpos, antígenos, enzimas, mediadores químicos, insulina…
- Vacina de DNA (pois a bactéria só clona o DNA)
Quais as 6 etapas da tecnologia do DNA Recombinante?
- Etapas:
- Isola-se o gene no DNA doador, com uma enzima de restrição.
- Isola-se o plasmídeo bacteriano/fungico
- Abertura do plasmídeo, COM A MESMA ENZIMA USADA PARA ISOLAR O GENE DE INTERESSE.
- Une-se o plasmídeo ao gene de interesse com o auxílio da DNA ligase.
- Devolução do plasmídeo recombinante para a bactéria.
- Multiplicação da bactéria, sintetizando a substância proteica e simultaneamente clonando os genes.
O que é e para que serve o DNA complementar ou DNAc
DNAc (muito usado para a insulina)
* DNA só com éxons
* Produzidos a partir de um RNAm
* Etapas:
* Descobre qual o RNAm depois do splicing (DNA secundário, só com éxons) que realmente produz insulina
* Tira da célula e em laboratório aplica a transcriptase reversa transformando em uma fita de DNA.
* Aplica a DNA polimerase e transforma ela em uma fita dupla de DNA só com éxons para a insulina
* Ai, sim coloca na bactéria.
* Não coloca em fungo por causa do splicing alternativo
Transgênicos
a] Existe transgênico natural?
b] O que são transgênicos?
c]Quais as 4 principais técnicas para gerar um transgênico?
Transgênicos
* Todo transgênicos são artificiais
* Organismos geneticamente modificados, pela ação do homem, usando as ferramentas da engenharia genética e a tecnologia do DNA recombinante.
* Seres que incorporam genes de uma outra espécie , passando a expressar uma característica que não possuíam.
* Técnicas:
* Microinjeção (animais)
* Canhão de tungstênio e ouro (biobalística, normalmente para vegetais)
* bolinhas + que atraem o DNA - e da tiro
* Eletroporação
* Aplica uma corrente e os poros do protoplasto (sem parede celular) abrem e o gene do meio entra.
* Agrobactérium tumefaciens
* Cancerígenas, tiram o que causa tumor na planta e coloca o gene de interesse
O que são células tronco?
- Pode se diferenciar em outros tipos de células
- Não pode se diferenciar em qualquer uma, dependendo da célula
- Algumas podem
O que são células troncos totipotententes?
- Totipotentes
* Se diferencia em qualquer tipo de célula e anexos embrionários
* Retirada da mórula
O que são células troncos pluripotentes?
- Pluripotentes
* Se diferencia em qualquer tipo de células menos os anexos embrionários
* Retiradas da blástula (blatocele, massa interna que não se diferenciou)
* Mais usada que as totipotentes por serem de fácil manuseio e maior quantidade
Quais são os dois tipos de células troncos embrionárias?
As totipotentes e pluripotentes
Quais os 3 tipos de células troncos adultas?
Multi
Oligo
e unipotentes
O que são as células troncos multipotentes?
- Multipotente
* Consegue se diferenciar na maioria dos tipos celulares, muito semelhante a uma pluripotente.
* Retirada do cordão umbilical, polpa do dente, da medula óssea…
O que são as células troncos oligopotentes?
- Oligopotente
* Se diferencial em células do mesmo tecido ou linhagem de onde foram retiradas.
* Célula tronco oligopotente mieloide: Hemácia, plaquetas, neutrófilos, basofilos, eosinófilos e monócitos.
O que são as células troncos unipotentes?
- Unipotente
* Só se diferencia em um único tipo de célula.
* Eritoblasto: eritrócito
* Leucoblasto: leucócito
O que é o PCR?
- Polimerase Chain Reaction (reação de polimerização em cadeia)
- Promove a clonagem do DNA, ou seja, amplificação da quantidade de DNA.
Quais os componentes para fazer um PCR?
- Componentes
- Amostra de DNA
- Nucleotídeos
- DNA polimerase da Thermus aquaticus (árquea)
- Taq. polimerase
- Primers de DNA (sintértico, não são fragmentos de RNA, Inicializadores ou sinalizadores))
- Termociclador (equipamento)
Quais as etapas, explique-as e quais as temperaturas de cada uma no PCR?
- Etapas (1 a 2 min)
- 1ª etapa (95˚C)
- Desnaturação do DNA
- Separa as duas fitas do DNA, rompendo as pontes de hidrogênio
- Desnaturação do DNA
- 2ª etapa (60˚C)
- Anelamento do Primer
- O primer se liga na extremidade 3
(porque ela lê e gera de 5para 3` da fita molde)- O primer delimita o que vai ser copiado
- O primer se liga na extremidade 3
- Anelamento do Primer
- 3˚ etapa (72˚C)
- Plimerização do DNA
- Apartir do primer, a DNA polimerase, sintetiza a fita complementar.
- Plimerização do DNA
- 1ª etapa (95˚C)
O que é o RT-PCR? Fale sobre.
RT-PCR
* Exame que detecta a presença de qualquer vírus de RNA
* Etapas:
* SOAB, com a secreção
* RNA viral, então usa a RT, transcripitase reversa
* Taq gera a segunda fita do DNA
* Faz PCR para ter grande quantidade de DNA viral
Fale sobre o exame de covid por antígeno.
- Etapas
- Coloca o SOAB num solvente
- Dissolve o vírus e deixa várias spikes
- No reservatório tem anti-spike
- Se tiver vão aparecer 2 traços
-Igual o de gravidez
DNA Fingerprints
O que é?
Quais os usos?
Quais as ferramentas?
- Impressão digital do DNA
- Usos:
- Criminalística
- Exame de paternidade
- Ferramentas:
- PCR
- Enzima de restrição
- Gel de eletroforese
- Separa fragmentos de DNA e proteínas pelo peso molecular.
Como é a aplicação do DNA Fingerprints na criminalística?
- Criminalistica
- A prova tem que ter todas as bandas iguais ao do suspeito para ser o culpado.
- Usa-se a mesma enzima de restrição.
Como funciona o DNA Fingerprints para teste de paternidade?
O que é a clonagem?
- Forma de reprodução assexuada
- Naturalmente (bipartição, brotamento …)
- Artificial
- Terapêutica
- Objetivo de obter células tronco para produzir novos órgãos para transplante.
- Reprodutiva
- Criação de clones para criar copias idênticas de um novo ser.
- Terapêutica
Qual o processo de uma clonagem artificial?
- Processo:
- Pega uma célula somática (teoricamente qualquer, mas nem sempre)
- Formam tecidos, órgãos e sistemas
- Usa se um óvulo da mãe ou de qualquer mulher da família por parte de mãe
- Mais fácil fazer clone de mulher porque pega o próprio óculo.
- Pois o DNA mitocondrial interfere no DNA celular, logo tem que ser o mais compatível possível.
- Retiro o núcleo do óvulo
- Transfiro o núcleo da célula somática para o óvulo
- O núcleo ainda está diferenciado, tem que desprogramar com descargas elétricas e substâncias químicas.
- Logo, vira um zigoto.
- Mórula -> Blástula -> se virar um novo ser é reprodutiva (proibido por ser antiético)
- Mórula -> Blástula (com a massa celular interna que é tronco) -> retira células troncos e produz tecidos e órgãos para transplante -> clonagem terapêutica
- Ser humano só produz tecidos, órgãos ainda não.
- Pega uma célula somática (teoricamente qualquer, mas nem sempre)
O que é a técnica IPS para produzir células troncos?
- A célula tronco pode ser criada a partir da indução de 4 genes (IPS) que são introduzidos em qualquer célula somática.
- Células tronco produzidas pela técnica do IPS
O que é CRISPR e Cas-9?
Como acontece na natureza e na tecnologia gênica?
- CRISPR
- Sequências palindrômicas repetidas igualmente interespaçadas.
- É a memória imunológica da bactéria / memória imunológica contra vírus
- Armazena DNA Viral (só funciona em vírus de DNA)
- Para produzir um RNA CRISPR, que é um guia
- Cas-9
- Enzima que corta o DNA em qualquer lugar desde que guiada por RNA guia
- É uma nuclease da bactéria (fica no nucleoide - núcleo da bactéria que não é organizado.)
- Os cientistas usam os dois para editar o DNA em qualquer lugar (Editoração)
- CRISPR só mexe em genes e não em cromossomos.
- Usado para curar doenças causadas por genes errados.
