Biotechnologies Flashcards
biotechnologie
utilisation d’organismes vivants pour engendrer de nouvelles méthodes de production et créer de nouveaux produits
génie génétique
méthode de manipulation des gènes à des fins pratiques
plasmide
molécule circulaire d’ADN qui se réplique séparément
possède peu de gènes
production d’un plasmide d’ADN recombiné
-découpage du squelette désoxyribose-phosphate par les enzymes de restriction
-ajout de fragment d’ADN provenant d’une autre source et les extrémités cohésives s’associent par appariement des bases
-ligature des brins par l’adn ligase
processus de clonage moléculaire
-insertion du gène dans plasmide (vecteur de clonage)
-plasmide inséré dans une bactérie
-cellule hôte mise en culture pour former un clône
utilité d’un plasmide bactérien
-peut l’obtenir des fournisseurs commerciaux
-peut manipuler pour former des plasmides recombinés par insertion de l’ADN étranger
quoi l’importance d’un gène antibiotique
gène de résistance aux antibiotiques(cellule bactérienne): seules ceux qui le possède vont survivre
qu’est ce qu’un vecteur de clonage
sert à introduire un ADN étranger dans une cellule hôte en facilitant sa réplication
vecteur d’expression
vecteur de clonage comportant un promoteur bactérien en amont du site de restriction à l’endroit où le gène eucaryote peut être inséré
problématique avec vecteur d’expression bactérien si gène eucaryote
-Pas de maturation de l’ARNm(épissage qui enlève les introns)
-pas de modification post-traduction
pour contourner il faut modifier cellules eucaryotes
étapes de l’amplification en chaîne par polymérase
- Dénaturation : chauffage pour séparer brins d’ADN
- Hybridation : refroidissement pour lier amorces aux extrémités
- Élongation : ajout de nucléotides par ADN polymérase
Électrophorèse sur gel d’agarose
sépare les acides nucléiques et protéines en fonction de leur tailles et de leur charges électrique
-molécules de charge négatives se dirigents vers électrode positive
-mettre colorant et exposer à lumière UV
Intérêt clonage organismes
potentiel à générer des cellules souches
cellules souches
cellules peu différenciées qui continue à se diviser en cellules spécialisées
pluripotence
cellules capables de se différencier en tout types de cellules sauf extra-embryonnaire
totipotence
différencie en toutes cellules de l’organismes
thérapie génique
guérir maladies génétiques en insérant allèles normal dans cellules somatiques atteintes
1.insertion ARN normal dans rétrovirus
2.virus infecte cellules patient prélevé et mis en culture
3. insertion ADN viral portant allèle normal inséré dans chromosomes
4.injection cellules modifiées patient
CRISPR-Cas9
alternative plus sécuritaire et plus précise, méthode défense des bactéries
-lie protéine Cas9 à ARN guide transformé pour dirigier cas9 vers gène cible (avec bonne séquence complémentaire)
2. séquence complémentaire ARN guide se lie au gène cible et sites actifs de Cas9 découpe brins ADN en 2
3. brins sont réparés par cellules par 2 moyens
production protéines recombinantes
chèvre porte gène protéine sang humain qu’elle sécrète dans son lait peut guérir humain
criminalistique
analyse des répétitions courtes en tandem (STR)