Biotechnologies Flashcards
biotechnologie
utilisation d’organismes vivants pour engendrer de nouvelles méthodes de production et créer de nouveaux produits
génie génétique
méthode de manipulation des gènes à des fins pratiques
plasmide
molécule circulaire d’ADN qui se réplique séparément
possède peu de gènes
production d’un plasmide d’ADN recombiné
-découpage du squelette désoxyribose-phosphate par les enzymes de restriction
-ajout de fragment d’ADN provenant d’une autre source et les extrémités cohésives s’associent par appariement des bases
-ligature des brins par l’adn ligase
processus de clonage moléculaire
-insertion du gène dans plasmide (vecteur de clonage)
-plasmide inséré dans une bactérie
-cellule hôte mise en culture pour former un clône
utilité d’un plasmide bactérien
-peut l’obtenir des fournisseurs commerciaux
-peut manipuler pour former des plasmides recombinés par insertion de l’ADN étranger
quoi l’importance d’un gène antibiotique
gène de résistance aux antibiotiques(cellule bactérienne): seules ceux qui le possède vont survivre
qu’est ce qu’un vecteur de clonage
sert à introduire un ADN étranger dans une cellule hôte en facilitant sa réplication
vecteur d’expression
vecteur de clonage comportant un promoteur bactérien en amont du site de restriction à l’endroit où le gène eucaryote peut être inséré
problématique avec vecteur d’expression bactérien si gène eucaryote
-Pas de maturation de l’ARNm(épissage qui enlève les introns)
-pas de modification post-traduction
pour contourner il faut modifier cellules eucaryotes
étapes de l’amplification en chaîne par polymérase
- Dénaturation : chauffage pour séparer brins d’ADN
- Hybridation : refroidissement pour lier amorces aux extrémités
- Élongation : ajout de nucléotides par ADN polymérase
Électrophorèse sur gel d’agarose
sépare les acides nucléiques et protéines en fonction de leur tailles et de leur charges électrique
-molécules de charge négatives se dirigents vers électrode positive
-mettre colorant et exposer à lumière UV
Intérêt clonage organismes
potentiel à générer des cellules souches
cellules souches
cellules peu différenciées qui continue à se diviser en cellules spécialisées
pluripotence
cellules capables de se différencier en tout types de cellules sauf extra-embryonnaire