biotechnologia/mutacje Flashcards
biotechnologia tradycyjna
wykorzystuje naturalnie występujące w przyrodzie organizmy lub produkowane przez nie substancje
dobór na drodze selekcji sztucznej - człowiek decyduje kto sie z kim skrzyżuje
naturalny mechanizm krzyżowania - bez ingerencji w genom
gdzie używamy biotechnologii tradycyjnej
przy procesach warzenia piwa
produkcji wina
wypiekania chleba
kiszenia kapusty i ogórków
zakwaszania mleka na jogurty kefiry
biotechnologia molekularna
umożliwia zmienianie genomów organizmów by otrzymać organizm o pożądanych cechach
co to są enzymy restrykcyjne
endonukleazy {enzymy mogące przecinać DNA} przecinają DNA w miescu wyznaczonym przez specyficzną sekwencje DNA
Enzymy restrykcyjne rozpoznają sekwencje palindrome o tępych lub lepkich końcach
co to są metylazy
modyfikują DNA po replikacji. enzymy dodają grupe metylową do jednej lub wielu zasad w każdym miejscy restrykcyjnym co sprawia ze enzymy restrykcyjne nie rozpoznaja DNA i nie tną tych miejsc.
Po co są ligazy?
łączą fragmenty DNA przecięte wcześniej przez enzymy restrykcyjne. pomaga w tworzeniu wiązań fosfodiestrowych między dwoma fragmentami DNA
polimeraza DNA
powiela fragmenty DNA dubudowywuje nukleotydy komplementarne do nici matrycowej
co to są sekwencje polindromowe?
ok 4-8 pr zasad azotowych które sa rozpoznawane przez enzymy restrykcyjne. Sekwencja zasad jednej nici jest taka sama jak nici komplementarnej jeżeli obie są odczytywane w kierunku 5’ do 3’
co to sa końce lepkie sekwencji palindromowych
zakończone są jednoniciowym fragmentem - posiadają wolne nukleotydy które łatwiej mogą sie przłączyć do innego lepkiego końca
Co to jest sonda molekularna?
jest to krótki sztucznie utworzony fragment kwasu nukleinowego. znakowany jest związkiem fluorescencyjnym aby był łatwy do zlokalizowania
po co jest hybrydyzacja DNA
pomaga nam znaleść określony gen w całym genomie
wykorzystywany często w diagnostyce chorób genetycznych
co to są biblioteki genomowe?
to zbió komórek bakterii które zawierają różne fragmenty genomu jednego organizmu
jakie sa rodzaje bibliotek genomowych?
- cDNA cząsteczki DNA bez intronów każda cząsteczka posiada sekwencje kodujące jednego genu
- biblioteka cDNA
najpierw jest odwrotna transkrypcja mRNA wyizolowanego z komórek. dane cDNA jest wstawiane do wketora
jak zachodzi klonowanie DNA
- plazmid i DNA pochodzące z innego organizmu są cietę tym samm enzymem restrykcyjny. Dzieki temu uzyskujemy cząsteczki o komplementarnych końcach
- Cząsteczki obu rodzajów są mieszane w wyniku czego ich lepkie końce łączą się parami. Ligaza DNA spaja fragmenty DNA
- plazmid obcym genem wprowadza się do komórki bakteryjnej - działanie prądem lub substancją chemiczną na ściane komórki bakteryjnej
- Plazmid ulega replikacji i dostaje się do komórek potomnych podczas podziaów komórkowych
co to łańcuchowa reakcja polimerazy PCR
jest to podstawowa technika biologii molekularnej która umożliwia powielenie określonego fragmentu DNA in vitro - poza organizmem
na czym polega łańcuchowa reakcja polimerazy - PCR
- Denaturacja DNA w ok 95 stopniach
- przyłączenie starterów ok 40-60 stopni
- Synteza komplementarnych nici DNA ok 70 stopni przy udziale termostabilnej polimerazy DNA
Termostabilna polimeraza DNA - jak powstaje?
jes to wyizolowana polimeraza od bakterii żyjących w bardzo wysokich temperaturach dlatego ich białka są odporne na denaturacje
jak zachodzi PCR?
zachodzi w cyklach ok 20-30 podczas kolejnych cykli liczba produktów wzrasta wykładniczo - 2 do potęgi n
jakie są zalety i wady PCR?
zalety
umożliwia szybkie i tanie powielenie bardzo małej ilości materiału genetycznego
wady
jest bardzo czułe - nawet nieiwelka ilość niepożądanego DNA może zostać powielona jeżeli zawiera sekwencje komplementarne do starterów i zaciemnić wynik