Biologie Sem3 Flashcards
But et principe pureté d’adn
Déterminer la Cc
Repose sur la pectro
3 méthodes utilisées et principe
Pureté d’ADN (spectro)
Extraction d’ADN (électrophorèse (puits))
PCR (électrophorèse)
But et principe extraction d’adn
Déterminer la présence d’ADN cible
Repose sur l’électrophorèse (grâce a une fluorescence)
⚠️ Présence et non pureté (peut être contaminé)
But et principe de la PCR
C’est l’amplification (multiplication)
Repose sur l’électrophorèse (si on a réussi l’amplification et mesurer la taille de l’adn)
Quel est la différence entre le niveau, densité et la présence de fluorescence
Présence: amplification réussi
Densité: la cc d’ADN amplifié
Niveau: taille de l’ADN
Combien de cycles et prk pas plus?
30 cycles car on perd du rendement
Quels sont les étapes de la PCR et combien de degrés
Dénaturation 95°C
Hybridation entre 55 et 70°C (Inférieur a la Tm)
Élongation 72°C
Que se passe-t-il pendant les étapes de PCR
Dénaturation: Séparer les deux brins d’ADN pour les rendre accessibles.
Hybridation : Permettre aux amorces de s’accrocher à l’ADN cible.
Élongation : Fabriquer de nouveaux brins d’ADN grâce à une enzyme.
C’est quoi Tm
Température de fusion correspond à la température à laquelle 50 % d’une double hélice d’ADN se sépare en deux brins simples.
Midori Green (role, but, ou ça se trouve) (4)
Agent intercalant
Provoque la fluorescence
Se cale entre les molécules d’adn
Frigo car CMR (gants allu, DASRI)
Rôle de l’alluminium
Protéger la paillasse contre les produits CMR
Tampon TE (role, but, ou ça se trouve)
Diluant d’ADN
Diluer l’ADN
Paillasse collective
Tampon TBE (role, but, ou ça se trouve)
X10(non utilisé), X 1 et récup (pr l’immersion du gel)
Sous plaque chauffante
MT(role, but, ou ça se trouve)
Déterminer la taille des fragments amplifiés
Congélateur
Les ≠ MT
Petit (vert) direct load (100 a 1000kb)
Grand (incolore donc 8+3 tampon de charge) (500 a 10 000 kn)
Tampon de charge (role, but, ou ça se trouve)
Alourdisseur de la solution (pas de l’adn)
Frigo
Bleu
Poudre d’agarose
sous plaques chauffantes
Bidon gris
Combien un puit
10 microlitres
Nom de:
Ci x Vi = Cf x Vf
1 1/10
Loi de la conservation de la matiere
Préparation d’agarose a 75%
Pr 100 ml = 0.750g
Pr 50 ml = 0.375g
Ce qu’il faut faire attention
6 μl de Midori Green après limpide
Faire fondre le gel a + de 100°C
Rincer la barre au-dessus de poubelle DASRI
Rôle du coton
Éviter la perte de matière/ évaporation de l’H2O
Revisions
Croquis du gel, tableau pureté souche
