biohemija Flashcards
metode razdvajanja na osnovu velicine molek
gel filtracija
dijaliza
gradijent gel elektroforeza
ultracentrifugiranje
metode razdvajanja na osnovu rastvorljivosti
precipitacija zasicenim ras soli
primena ras razlicitih dielektricnih konstanti
metode razdvajanja na osnovu nael jona
jonoizmenjivacka hromatografija
elektroforeza
dijaliza
na osnovu velicine cestica, vece se zadrzavaju na membrani manje prolaze kroz pore
po cemu se razl membrane kod dijalize
po poroznosti koja zavisi od vel pora
za sta se koristi dijaliza
za razdvajanje ili koncentrisanje molek velike molek mase tj za razdvajanje dve sup na osnovu konc gradijenta
prakticna primena dijalize
u uklanjanju soli iz rastvora proteina i koncentrisanju uzorka ili izmeni pufera
cime precipitiramo proteine
amonijum sulfatima
sta radimo posle precipitacije proteina
koristimo dijalizu da izdvojimo proteine od rastvora soli
kako se izvodi dijalizao
odgovarajuci uzorak (dijalizator)se stavlja u crevo za dijalizu i potapa se u veliku zapreminu vode ili pufera(dijalizat) posle oar sati uz stalno mesanje pod uticajem konc gradijenta mali molek prolaze kroz membranu u spoljasnji rastvor i ovaj prelaz se odvija dok se ne postigne ravnoteza konc izmedju dva rastvora
veliki molekuli ostaju u crevu za dijalizu a izlaskom malih molek iz creva procesom osmoze u crevo ulazi voda pa se rastvor za dijalizu razblazuje
koriscenje dijalizu za koncentrisanje rastvora
crevo za dijalizu sa uzorkom koji treba da se ukoncentrise se stavi u pufer sa sup veluke molek mase i u tu svrhu se koristi polietilen glikol koji se lako rastvara u vodi. voda izlazi iz creva jer moze da prodje kroz pore i hidratise polimere time se smanjuje zapremina u crevu a uzorak se koncentrise
zarim se uzme spric sa polupropustljivim membranom i pod pritiskom pufer iz uzorka prolazi kroz membranu dok proteini zaostaju u spricu
faze dijalize kroz polupropustljivy membranu
- molekul iz dijalizatora ulazi u poru membrane
- molekul prolazi kroz poru
- molekul napust poru u ulazi u dijalizat
brzina dijalize zavusu od prve faze jer je ina najsporija jer tada molekuli zauzimaju odredjeni polozaj u porama, istali koraci ne uticu na brzinu jer sy molek vec u porama
stepen dijalize
zavisi od :
konc gradihenta molek koji difunduju
konstante difuzije molekula
temp
povrsine membrane za difuziju
oblika molek koji difunduju
povecanje svih ivoh parametara ubrzava dijalizu ali se nabize manipulise sa gradijentom i povrsinom
konc gradijent
zavisi od
zapremine dijalizata
sastava dijalizata
broja izmena dijalizata
zapremina dijalizata
racuna se jednacinom
sastav dijalizata
stepen dijalize zavisi od sastava dijalizata a najveci je ukoliko se dijaliza izvodi destilovanom vodom ali se u praksi koristi pufer odredjenog ph i jonske jacine radi stabilizacije molek koji difunduju
broj izmene dijalizata
konc gradijent se odrzava na visokom nivou brzim mesanjem ili stalnim uklanjanjem dijalizata. uklanjanje je daleko pogodnije u odnosu na dijalizu u velikoj zapremini
temperatura
dijaliza direktno zavisi od temp. Na povisenim temp viskoznost dijalizatora je manja pa se povecava stepen difuzije. Dijaliza molekula nestabilnih na povisenoj temp se izvodi na hladnom
povrsina membrane
postoji pravilo da se 80% dijaliza zavrsava u toku od 4h. da bi se skratilo vreme moze
da se poveca povrsina membrane
velicina i obl difuzibilnih cestica
manje cestice prolaze brze u odnosu na cestice koje su slicne velicine kao pore. najcesce se koristi membrana od celofana u obl creva jer ima
minimalnu adaorpciju za razlicite supstance. struktura celofana podseca na sundjer. osnovne karakteristike membrana su odredjene velicinom pora u kanala pa su sve membrane podeljene prema molek masi najmanjeg globularnog proteina koji ne prolazi kroz membranu prema obome se definise GRANICNA VREDNOST MWCO. posto se ovo odnosi na globularne proteine linearni proteini iste molek mase ce proci, zato se za linearne proteine koriste membrane sa manjim MWCO
donnanova ravnoreza
izmedju dva rastvora odvojena polupropustljivom membranom od kojih jefan ras sadrzi nedifuzibilnr molekule usposyavlja se dinamicka ravnoteza sa nejednakom raspodelom jona koji mogu da difunduju
kad je donnanov efekaf najmanje izraen
kad je pH srecine u kojoj se nalaze protrini jednaka njihovoj pI
donnanov efekat na nivou kaoilara
plazma proteini su nedifuzibilni pa ne prolaze kroz membranu kapilara sto dovodi do stvaranja donnanovog efekta. Posledica ovog efekta je ulazak Na joja u krvne sudove pri cemu bi konc na trebala da bude veca u plazmiu odnosu na ekstravaskularnu tecnost. Medjutim dokazano je da su konc na u oba jonska prostora slicne. To se desava znog efekta nerastvornih sup u plazmi. joji su prisutni samo u vodenom delu plazme gde su razblazeni sa protrinima kaf se mete u celoj olazmi. Ukupna kol Na u vodenom delu olazme jeste veca nego u ekstravaskularnoj tecnosti ali zbog razblazenja proteinima ove dve vrednosti su slicne jer u evt nema proteina
efekat na nivou celijske membrane
u ict se nalazi velika kolicina nedifuzibilnih anjona koji ne prolaze membranu, ect sadrzi malu kolicinu ptoteina. donanov efekat se stvara i uslovljava ulazak suprotno nael celuija, Na radi neutralizacije negativnog narlektrisanja ali posto su Na i proteini osmotski aktivni stvata se osmotski pritisak koji dovodi donulaska tecnosti u celiju-bubrenje, pucanje
Na/K pumpa i nepermeabilnosy membrane za Na je mehanizam koji ce spreciti pucanje celije. Na se nalazi sa spoljne str membrane i izvlaci difuzibilne anjone iz celije