biohemija

Question 1

metode razdvajanja na osnovu velicine molek

Answer 1

gel filtracija
dijaliza
gradijent gel elektroforeza
ultracentrifugiranje

Question 2

metode razdvajanja na osnovu rastvorljivosti

Answer 2

precipitacija zasicenim ras soli
primena ras razlicitih dielektricnih konstanti

Question 3

metode razdvajanja na osnovu nael jona

Answer 3

jonoizmenjivacka hromatografija
elektroforeza

Question 4

dijaliza

Answer 4

na osnovu velicine cestica, vece se zadrzavaju na membrani manje prolaze kroz pore

Question 5

po cemu se razl membrane kod dijalize

Answer 5

po poroznosti koja zavisi od vel pora

Question 6

za sta se koristi dijaliza

Answer 6

za razdvajanje ili koncentrisanje molek velike molek mase tj za razdvajanje dve sup na osnovu konc gradijenta

Question 7

prakticna primena dijalize

Answer 7

u uklanjanju soli iz rastvora proteina i koncentrisanju uzorka ili izmeni pufera

Question 8

cime precipitiramo proteine

Answer 8

amonijum sulfatima

Question 9

sta radimo posle precipitacije proteina

Answer 9

koristimo dijalizu da izdvojimo proteine od rastvora soli

Question 10

kako se izvodi dijalizao

Answer 10

odgovarajuci uzorak (dijalizator)se stavlja u crevo za dijalizu i potapa se u veliku zapreminu vode ili pufera(dijalizat) posle oar sati uz stalno mesanje pod uticajem konc gradijenta mali molek prolaze kroz membranu u spoljasnji rastvor i ovaj prelaz se odvija dok se ne postigne ravnoteza konc izmedju dva rastvora
veliki molekuli ostaju u crevu za dijalizu a izlaskom malih molek iz creva procesom osmoze u crevo ulazi voda pa se rastvor za dijalizu razblazuje

Question 11

koriscenje dijalizu za koncentrisanje rastvora

Answer 11

crevo za dijalizu sa uzorkom koji treba da se ukoncentrise se stavi u pufer sa sup veluke molek mase i u tu svrhu se koristi polietilen glikol koji se lako rastvara u vodi. voda izlazi iz creva jer moze da prodje kroz pore i hidratise polimere time se smanjuje zapremina u crevu a uzorak se koncentrise
zarim se uzme spric sa polupropustljivim membranom i pod pritiskom pufer iz uzorka prolazi kroz membranu dok proteini zaostaju u spricu

Question 12

faze dijalize kroz polupropustljivy membranu

Answer 12

1. molekul iz dijalizatora ulazi u poru membrane
2. molekul prolazi kroz poru
3. molekul napust poru u ulazi u dijalizat
   brzina dijalize zavusu od prve faze jer je ina najsporija jer tada molekuli zauzimaju odredjeni polozaj u porama, istali koraci ne uticu na brzinu jer sy molek vec u porama

Question 13

stepen dijalize

Answer 13

zavisi od :
konc gradihenta molek koji difunduju
konstante difuzije molekula
temp
povrsine membrane za difuziju
oblika molek koji difunduju

povecanje svih ivoh parametara ubrzava dijalizu ali se nabize manipulise sa gradijentom i povrsinom

Question 14

konc gradijent

Answer 14

zavisi od
zapremine dijalizata
sastava dijalizata
broja izmena dijalizata

Question 15

zapremina dijalizata

Answer 15

racuna se jednacinom

Question 16

sastav dijalizata

Answer 16

stepen dijalize zavisi od sastava dijalizata a najveci je ukoliko se dijaliza izvodi destilovanom vodom ali se u praksi koristi pufer odredjenog ph i jonske jacine radi stabilizacije molek koji difunduju

Question 17

broj izmene dijalizata

Answer 17

konc gradijent se odrzava na visokom nivou brzim mesanjem ili stalnim uklanjanjem dijalizata. uklanjanje je daleko pogodnije u odnosu na dijalizu u velikoj zapremini

Question 18

temperatura

Answer 18

dijaliza direktno zavisi od temp. Na povisenim temp viskoznost dijalizatora je manja pa se povecava stepen difuzije. Dijaliza molekula nestabilnih na povisenoj temp se izvodi na hladnom

Question 19

povrsina membrane

Answer 19

postoji pravilo da se 80% dijaliza zavrsava u toku od 4h. da bi se skratilo vreme moze
da se poveca povrsina membrane

Question 20

velicina i obl difuzibilnih cestica

Answer 20

manje cestice prolaze brze u odnosu na cestice koje su slicne velicine kao pore. najcesce se koristi membrana od celofana u obl creva jer ima
minimalnu adaorpciju za razlicite supstance. struktura celofana podseca na sundjer. osnovne karakteristike membrana su odredjene velicinom pora u kanala pa su sve membrane podeljene prema molek masi najmanjeg globularnog proteina koji ne prolazi kroz membranu prema obome se definise GRANICNA VREDNOST MWCO. posto se ovo odnosi na globularne proteine linearni proteini iste molek mase ce proci, zato se za linearne proteine koriste membrane sa manjim MWCO

Question 21

donnanova ravnoreza

Answer 21

izmedju dva rastvora odvojena polupropustljivom membranom od kojih jefan ras sadrzi nedifuzibilnr molekule usposyavlja se dinamicka ravnoteza sa nejednakom raspodelom jona koji mogu da difunduju

Question 22

kad je donnanov efekaf najmanje izraen

Answer 22

kad je pH srecine u kojoj se nalaze protrini jednaka njihovoj pI

Question 23

donnanov efekat na nivou kaoilara

Answer 23

plazma proteini su nedifuzibilni pa ne prolaze kroz membranu kapilara sto dovodi do stvaranja donnanovog efekta. Posledica ovog efekta je ulazak Na joja u krvne sudove pri cemu bi konc na trebala da bude veca u plazmiu odnosu na ekstravaskularnu tecnost. Medjutim dokazano je da su konc na u oba jonska prostora slicne. To se desava znog efekta nerastvornih sup u plazmi. joji su prisutni samo u vodenom delu plazme gde su razblazeni sa protrinima kaf se mete u celoj olazmi. Ukupna kol Na u vodenom delu olazme jeste veca nego u ekstravaskularnoj tecnosti ali zbog razblazenja proteinima ove dve vrednosti su slicne jer u evt nema proteina

Question 24

efekat na nivou celijske membrane

Answer 24

u ict se nalazi velika kolicina nedifuzibilnih anjona koji ne prolaze membranu, ect sadrzi malu kolicinu ptoteina. donanov efekat se stvara i uslovljava ulazak suprotno nael celuija, Na radi neutralizacije negativnog narlektrisanja ali posto su Na i proteini osmotski aktivni stvata se osmotski pritisak koji dovodi donulaska tecnosti u celiju-bubrenje, pucanje
Na/K pumpa i nepermeabilnosy membrane za Na je mehanizam koji ce spreciti pucanje celije. Na se nalazi sa spoljne str membrane i izvlaci difuzibilne anjone iz celije

Question 25

princip vezbe

Answer 25

protein je negativno naelektrisan u nekom ras ako je pG vrednost tog ras veca od njegove pI i pozitivno nael ako je manji. Protein zelatin ima pI 4.8 pa ce u kis sredini biti pozitivan. ako dijalizujemo ras zelatina u destilovanoj vodi usled donanovog efekta ce doci do povecanja koncentracije vodonikovih jona sa suprotne str membrane(dujalizat)