ADN RECOMBINANTE Flashcards
¿Cuáles son los 2 tipos de ADN en las bacterias?
- ADN cromosomico (Escencial→nucleoide)
- Plásmido (No escencial→Le da características nuevas a las bacterias)
Eg→resistencia a los antibioticos
¿Qué tipo de enzimas son las enzimas de restricción?
endonucleasas encargadas de romper enlaces fosfodiéster
Función de las enzimas de restricción
Es un mecanismo de defensa de las bacterias frente la entrada de ADN foráneo
* Degradan ADN extraño
* No degradan el ADN propio de la bacteria
¿Cómo se nombran a las enzimas de restricción?
-
Acronimo de 3 letras cursivas
* 1° letra es el género de la bacteria
* 2 y 3° nombre de la especie - Letras/números→cepa
- Número romano→dependiendo el orden en que se descubrieron
Eg→EcoR I
Partes de las enzimas de restricción
- Endonucleasa→degrada el ADN extraño, reconocen una secuencia y cortan el ADN
- Enzimas de sistema de modificación (metilasas)→modifican el ADN propio para que no sea degradado
¿Cuáles son los tipos de endonucleasas de restricción?
- Tipo I→sitio de corte es lejos del sitio de reconocimiento (1000 pb) y aleatorio (río ⬆️ o río ⬇️)
- Tipo II→reconoce secuencias palindrómicas y sitio de corte =sitio de reconocimiento
- Tipos III→sitio de corte es lejos del sitio de reconocimiento (20-30 pb).
- Tipo IV→reconoce ADN metilado
polindrómica→se lee igual de izq a derecha y visceversa (ANA)
¿Cuáles son los 2 tipos de corte?
- Asimétrico (cohesivos)→cortan en sitios ligeramente diferentes y se crean extremos sobresalientes con secuencias de bases no emparejadas.
- Simétrico (Romo)→corta en el mismo lugar, dejando extremos sin ninguna base sobresaliente
¿Qué tipo de corte se utiliza para que el ADN externo se una al plásmido de la bacteria?
corte asimétrico
V/F se utiliza la misma enzima de restricción para cortar el ADN y el plásmido para que queden las mismas pares de bases
verdadero
¿Qué es un vector?
Molécula de doble cadena portadora de un ADN extraño
¿Cuáles son los 2 tipos de vectores?
- Clonación→La bacteria que tiene el vector se replica muchas veces. (replicar un fragmento de ADN de interés en una célula huésped)
- Expresión→La bacteria que tiene el vector tiene la info. suficiente para formar una proteína
Partes de un vector de clonación
- origen de replicación: “marca de inicio” que permite que el vector se duplique dentro de la célula.
- sitio múltiple de clonación: secuencia reconocida por las enzimas de restricción para insertar el ADN complementario.
- Marcador de selección: gen incorporado en un vector que ayuda a identificar cx. que han sido transformadas exitosamente
Ejemplos de marcadores de selección
- Resistencia antibióticos
- Proteína verde fluorescente
Eg: cx con el vector se pinta de color verde o tiene resitencia a antibióticos
se expresa en las cx. huesped
Partes de un vector de expresión
- origen de replicación
- sitio múltiple de clonación
- Marcador de selección
- Promotor (ayuda a iniciar transcripción)
- IRES: sitio de entrada a ribosoma (secuencia de nt que permite que los ribosomas inicien la traducción)
- secuencia de poliA
tipo vector
plásmidos
- Tiene doble cadena de ADN (dsDNA)
- circulares
- separados del ADN cromosomico
- localización: bacterias y levaduras
