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BIOMOL parcial 2 > ADN recombiante > Flashcards

ADN recombiante Flashcards

1
Q

¿Qué es el ADN recombinante?

A

es una molécula que proviene de la unión artificial de dos fragmentos de ADN

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2
Q

¿Qué es la tecnología de ADN recombinante?

A

es el conjunto de técnicas que permiten aislar un gen de un organismo, para su posterior manipulación e inserción en otro diferente

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3
Q

¿Quiénes recibieron un premio nobel por el descubrimiento de las enzimas de restricción?

A

Werner Arber yHamilton Smith, Daniel Nathans

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4
Q

¿Por qué usamos la tecnología del ADN recombinante?

A

podemos hacer que un organismo (animal, vegetal, bacteria, hongo) o un virus produzca una proteína que le sea totalmente extraña

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5
Q

¿Cuáles son las 2 herramientas fundamentales para la tecnología del ADN recombinante?

A

las enzimas de restricción y los vectores de clonación del ADN

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6
Q

¿Cuál podría ser un uso de la tecnología del ADN recombinate?

A

Uno de los usos es en la producción de insulina exógena a partir de una bacteria.

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7
Q

Qué es la clonación molecular?

A

es una técnica que produce grandes cantidades de un segmento de DNA específico. El segmento de DNA que se clona se une primero con un ADN vector, que es un vehículo para transportar el DNA extraño a una célula hospedadora adecuada, como la bacteria E.col

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8
Q

Son aquellas móleculas consideras las tijeras moleculares

A

Son las enzimas de restricción, endonucleasas, que funcionan cortando la doble cadena de ADN a través del esqueleto de fosfatos sin dañar las bases.

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9
Q

¿Cómo se producen las enzimas de restricción?

A

son producidas por bacterias como método de defensa contra virus y degradan el ADN extraño

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10
Q

¿Qué nos permiten hacer las enzimas de retricción?

A

permiten cortar el genoma de cualquier organismo en pequeños fragmentos llamados fragmentos de restricción

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11
Q

¿Cuáles son los tipos de extremos que dejan las enzimas de restricción?

A

Cohesivos (pegajosos)
Romos (rasurados)

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12
Q

son generados cuando la enzima corta las dos hebras asimétricamente, dejando los extremos de cada hebra de simple cadena complementarios entre sí, hablamos de…

A

Extremos cohesivos (pegajosos)

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13
Q

son generados cuando la enzima corta las dos hebras por el mismo lugar, generando dos extremos doble cadena.

A

Extremos romos (rasurados)

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14
Q

¿Qué factores pueden afectar la actividad de las enzimas de restricción?

A
  • Purezas biológicas del ADN
  • Contaminantes como detergentes y estabilizadores
  • pH y temperatura adecuados
  • Grado de metilación del ADN
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15
Q

¿Qué son los vectores en el contexto de las técnicas de ADN recombinante?

A

Los vectores son moléculas transportadoras que transfieren y replican fragmentos de ADN que llevan insertados mediante técnicas de ADN recombinante.

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16
Q

¿Qué requisito fundamental debe cumplir una molécula para servir como vector?

A

Una molécula debe ser capaz de replicarse junto con el fragmento de ADN que transporta para servir como vector.

17
Q

¿En qué se diferencian los vectores de clonación?

A

Los vectores de clonación difieren en la especificidad de la célula huésped, el tamaño de los insertos que pueden transportar y características como el número de copias que producen y los genes marcadores que contienen.

18
Q

Menciona dos características importantes de los vectores de clonación.

A
  1. El tamaño de los insertos que pueden transportar.
  2. El número y tipo de genes marcadores que contienen.
19
Q

¿Qué determina el tamaño de los fragmentos de restricción?

A

El tamaño de los fragmentos de restricción viene determinado por cuán a menudo una enzima de restricción específica corta el ADN.

20
Q

¿Cuál es la fórmula para calcular el tamaño promedio de los fragmentos generados por una enzima de restricción?

A

El tamaño promedio de los fragmentos se calcula con la fórmula
4𝑛, donde
𝑛n es el número de bases del sitio de reconocimiento de la enzima.

21
Q

¿Por qué los plásmidos usados en clonación contienen un gen de resistencia a antibióticos?

A

Los plásmidos contienen un gen de resistencia a antibióticos para permitir la selección de bacterias que han incorporado el plásmido, ya que solo estas sobreviven en un medio con antibióticos.

22
Q

¿Qué sucede con las bacterias que no recolectan el plásmido en un medio con antibióticos?

A

Las bacterias que no recolectan el plásmido mueren al no tener el gen de resistencia al antibiótico.

23
Q

¿Qué ocurre con cada bacteria que incorpora un plásmido?

A

Cada bacteria que incorpora un plásmido da lugar a una colonia o comunidad de bacterias idénticas que contienen el plásmido.

24
Q

¿Cómo se identifican las colonias que contienen el plásmido adecuado?

A

Las colonias se analizan mediante técnicas como PCR o el uso de enzimas de restricción para identificar las que contienen el plásmido adecuado.

25
Q

¿Qué se hace con una colonia que contiene el plásmido adecuado?

A

La colonia se deja crecer a mayor escala para producir proteínas o más plásmidos según sea necesario.

26
Q

¿Qué es la reacción en cadena de la polimerasa (PCR)?

A

La PCR es una técnica que permite hacer muchas copias de una región específica de ADN in vitro, es decir, en un tubo de ensayo en lugar de un organismo.

27
Q

¿Qué tipo de ADN polimerasa se utiliza en la PCR y por qué es especial?

A

Se utiliza la Taq polimerasa, una ADN polimerasa termoestable aislada originalmente de Thermus aquaticus, una bacteria que vive en manantiales calientes a temperaturas mayores de 90 °C.

28
Q

¿Qué elementos son esenciales para realizar una PCR?

A
  1. ADN polimerasa termoestable (como la Taq polimerasa).
  2. Cebadores de ADN diseñados específicamente para la región de interés.
  3. La región de ADN que se desea amplificar.
29
Q

¿Qué sucede durante los ciclos de temperatura en la PCR?

A
  1. Desnaturalizar el ADN (separar las hebras).
  2. Hibridar los cebadores con las secuencias complementarias.
  3. Extender las cadenas con la Taq polimerasa, produciendo copias de la región blanco.
30
Q

¿Cuáles son algunas aplicaciones de la PCR?

A
  1. Clonación de ADN.
  2. Diagnóstico médico.
  3. Análisis forense de ADN.
31
Q

¿Cuáles son los tres pasos básicos de la PCR?

A
  1. Desnaturalización (96 °C)
  2. Templado (50-60 °C)
  3. Extensión (72 °C)
32
Q

¿Qué ocurre durante la fase de desnaturalización en la PCR?

A

Durante la desnaturalización (96 °C), las cadenas de ADN se separan o desnaturalizan, proporcionando moldes de cadenas sencillas para los pasos siguientes.

33
Q

¿Qué sucede en el paso de templado durante la PCR?

A

En el templado (50-60 °C), los cebadores se unen a sus secuencias complementarias en las cadenas sencillas de ADN molde.

34
Q

¿Qué ocurre durante la etapa de extensión en la PCR?

A

Durante la extensión (72 °C), la Taq polimerasa extiende los cebadores y sintetiza nuevas cadenas de ADN complementarias.

35
Q

¿Por qué se utiliza la Taq polimerasa en la etapa de extensión?

A

Se utiliza la Taq polimerasa porque es termoestable y puede funcionar eficientemente a la temperatura elevada de 72 °C necesaria para la síntesis de ADN.

36
Q

¿Qué ocurre con los fragmentos de ADN del mismo tamaño durante la electroforesis en gel?

A

Los fragmentos de ADN del mismo tamaño forman una “banda” en el gel, ya que migran la misma distancia bajo un campo eléctrico.

37
Q

¿Cómo se hacen visibles las bandas de ADN en un gel?

A

Las bandas de ADN se hacen visibles al teñir el gel con un pigmento que se une al ADN, como bromuro de etidio o SYBR Green.

38
Q

¿Qué permite identificar una banda en el gel?

A

La longitud de los fragmentos de ADN en una banda se puede identificar comparándola con un marcador de peso molecular conocido (ladder).

39
Q

¿Por qué los fragmentos de ADN del mismo tamaño migran juntos en un gel?

A

Porque tienen la misma carga y tamaño, lo que hace que se desplacen a la misma velocidad en el gel durante la electroforesis.

BIOMOL parcial 2 (5 decks)

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