a

Question 1

Para qué se usan los adyuvantes?

Answer 1

Inyectados junto al antígeno en la vacuna hacen más efectiva la respuesta inmune. Además, permiten ahorrar antígeno, y lo mantienen en la zona donde se inyectó por un tiempo mayor.

Question 2

Qué adyuvante no usaría en humanos?
a)Freud
b)Saponinas
c)Compuestos de aluminio

Answer 2

a

Question 3

Si el material de su vacuna es particulado, qué vía de administración elegiría? Y si es soluble?

Answer 3

Si fuese particulado es recomendable vía intravenosa, y si es soluble puede ser intramuscular, intraperitoneal, subcutánea e intradérmica.

Question 4

En un ratón, donde es recomendable inyectar una vacuna soluble?

Answer 4

Vía subcutánea, porque sus músculos son muy pequeñitos y podría sangrar mucho.

Question 5

Si el antígeno de la vacuna se trata de un péptido sintético, qué compuesto agregaría adicionalmente para estimular a los linfocitos?:
a)Metanol
b)SDS
c)FIS
d)Compuesto de Freud

Answer 5

c)FIS

Question 6

Mencione la ventaja de usar ácido caprílico por sobre sulfato de amonio en la purificación de inmunoglobulinas

Answer 6

El ácido caprílico de pKa 4,8 hace precipitar la albúmina, principal proteína contaminante, dejando en solución las Ig por lo que es fácil recuperarlas. Por otro lado, el sulfato de amonio las hace precipitar pero podrían formar agregados y generarse pérdidas.

Question 7

Si usted posee una muestra de 500 uL de suero, cuanto ácido caprílico añadiría en total. Recuerde que se añade paulatinamente,

Answer 7

Dado que la proporción es de 40 uL de ácido por mL de suero, añadirá 20 uL de ácido.

Question 8

Usted posee una muestra que supuestamente contiene la proteína X. La desea cuantificar, y utiliza un Elisa Indirecto pero no aparece nada de proteína. Luego, realiza un Elisa Sandwich y sí hay proteína. Su profesor le dice que usted hizo mal los procedimientos porque el Elisa Indirecto es la técnica de cuantificación más sensible. Qué le diría usted?

Answer 8

Que está equivocado. El Elisa Sandwich es la más sensible porque al tapizar la placa de anticuerpos anti-X, la probabilidad de que las pocas moléculas de “X” se peguen a la placa son mayores que si la placa no esta recubierta por dichos anticuerpos.

Question 9

Explique porqué un anticuerpo en glicerol se añade en dilución 1:5000 y uno sin glicerol en 1:10.000

Answer 9

Porque el guardado en glicerol ya contiene una dilución previa.

Question 10

En qué diluiría su anticuerpo?

Answer 10

En solución de bloqueo (leche al 1% por ejemplo), ya que se minimizan los posibles anticuerpos inespecíficos que podrían generar un falso positivo.

Question 11

Qué vemtaja tiene usar PBST por sobre PBS?

Answer 11

El tween-20 remueve el exceso de proteínas y anticuerpos. Debe ser al 0,05%.

Question 12

Qué es lo último que se añade en la polimnerización de un gel de poliacrilamida?
a)Persulfato de amonio
b)TENED
c)Acrilamida

Answer 12

b)TEMED

Question 13

Qué contiene el buffer de Carga?

Answer 13

Tris-HCl (estabilidad del pH)
SDS (carga negativa y denaturación)
Glicerol (densidad)
beta-mercaptoetanol (denaturación)
Azul de bromo fenol (frente de corrida)

Question 14

En westerblot, se puede teñir el gel de poliacrilamida con azul de coomasie? Cual tinción usaría y en qué paso)

Answer 14

No se puede porque la tinción es irreversible e interferirá con el traspaso a la membrana . Para chequera el paso desde el gel a la membrana se podría utilizar rojo Ponceau, tinción que es reversible.

Question 15

Si la membrana es de nitrocelulosa la activaría con metanol?

Answer 15

No, esa es la de PVDF.

Question 16

Usted debe hacer una transferencia desde el gel a la membrana pero cuenta con máximo 10 minutos, pues tiene cita al médico. Qué técnica usaría?

Answer 16

Semihúmeda, es la más rápida. En 7 minutos podría estar lista.

Question 17

Usted está preparando la cámara de transferencia y se da cuenta que le falta el rodillo. Dará igual si se salta dicho paso?

Answer 17

No, porque eliminar las burbujas es fundamental para una correcta transferencia. Si justo la burbuja quedó en la banda de mi proteína blanco, entonces, podría perderla.

Question 18

Cual es la importancia de tener un gen houskeeping en westerblot?

Answer 18

ayuda a afirmar que la mayor o menor expresión de genes de esa célula se debe específicamente a la condición de la célula, y no a un aumento de expresión de proteínas en general.

Question 19

Respecto a la fluorescencia. Explique porqué la longitud de onda de emisión es siempre mayor a la de absorción.

Answer 19

Porque el fluoróforo absorbe un fotón de longitud de onda específica en la cual uno de sus electrones se excita pasando a un nivel energético mayor, pero como dicho estado es inestable, rápidamente el electrón pierde energía en forma de calor bajando a un nivel inferior, pero que sigue siendo mayor al inicial. Luego, para volver a su estado basal el electrón emite energía en forma de luz, la cual es de menor energía (o mayor longitud de onda), dado que una parte fue emitida como calor previamente.

Question 20

usted tiene una muestra con marcada con dos fluoróforos: el fluoróforo 1 tiene un espectro de absorción que abarca desde 200 nm - 280 nm con peack en 250 nm. El fluoróforo 2 tiene un espectro de absorción desde 230-300, con peack en 270 nm.
lamentablemente ambos fluoróforos emiten en el mismo rango a 488 de color verde. A qué lomgitud de onda excitaría cada fluoróforo para evitar falsos positivos?

Answer 20

En el caso del fluoróforo 1 excitaría bajo 230, podría ser 220, y en el del 2 sobre 280, podría ser 290. Aunque la señal emitida sea baja, se está evitando obtener falsos positivos.

Question 21

Para qué sirve la fijación en inmunofluorescencia?

Answer 21

Sirve para conservar fielmente el contenido biológico tal como se encontraba in vivio.

Question 22

Qué compuestos fijan, cuales son sus mecanismo de acción, usos más frecuentes, ventajas y desventajas?

Answer 22

El glutaraldehído: unión entre grupos amino de proteínas. Microscopía electrónica. Conservación de las estructuras finas. Altera epítopes causando fluorescencia inespecífica.
p-formadehído: unión entre grupos amino de proteínas. En fluorescencia citoquímica. Rápida penetración en la célula, genera menor autofluorescencia, pero genera menos puentes entre los aminos.
Metanol/acetona:
Por precipitación de proteínas y carbohidratos. Amplia variedad de estudios. Fijación más rápida, y además de fijar permeabiliza. Pero puede generar contracción de la muestra y alterar el patrón de localización de los antígenos.

Question 23

Cuales son las ventajas y desventajas de una inmunodetección directa y una indirecta?

Answer 23

En la directa el anticuerpo lleva acoplado al fluorocromo. Es menos sensible, y más específica. En la indirecta se usa un anticuerpo secundario anti-anticuerpo primario. La reacción es de mayor intensidad pero de menor especificidad y mayor reactividad cruzada.

Question 24

Diga el orden de los pasoso en una inminofluorescencia de una proteína entracelular

Answer 24

1.Fijación (metanol)
2.Permeabilización (tritón)
3.Bloqueo (BSA)
4.Adición de anticuerpos.
5.Adición de tinciones (DAPI y RODAMINA)
6.Visualización al microscopio.

Question 25

Si su proteína de interés es intracelular. Qué blanco haría usted)

Answer 25

Un tratamiento idéntico pero sin el paso de permeabilización. No debería ver nada. SI veo algo, la señal está marcando un falso positivo, o mis células se rompieron.

Question 26

Qué paso extra debería hacer si su muestra es un corte de músculo esquelético?

Answer 26

Debería embeber el tejido en parafina, luego realizar un corte fino, luego retirar la parafina con un solvente similar al petróleo, luego los pasos son iguales.

Question 27

Cuáles son los tres sistemas de un citómetro de flujo?

Answer 27

Sistema de Fluidos: para alinear las células.
Óptico: fuente de excitación y sensor para detectar señale
Elcetrónicos: para convertir las señales ópticas en eléctricas.

Question 28

Cuántos eventos detecta el equipo por segundo?

Answer 28

entre 100-500.

Question 29

Con cuántos eventos mínimo diría usted que los resultados son confiables?

Answer 29

mínimo con 5000 eventos. Para publicar son 10.000.

Question 30

Qué detecta el sensor Foward Scatter? Y el Side Scatter?

Answer 30

El fsc detecta el tamaño, mientras que el ssc la complejidad celular.

Question 31

En qué sentido captura el FSC? y EL SSC?

Answer 31

El FSC en sentido frontal al paso de luz, y el SSC en 90º u ortogonal.

Question 32

Cuál es el láser comúnmente utilizado?

Answer 32

488

Question 33

Si usted está trabajando con células vivas, y detecta una mancha al inicio de los ejes y muy alta, que pudo haber pasado?

Answer 33

Son células muertas probablemente, por lo que el tratamiento de la muestra no fue el adecuado, o bien, se encontraban muertas de antes.

Question 34

Indique qué gráfico es más confiable: un de FSC vs SSC, uno de A-FSC vs A-SSC

Answer 34

el que grafica el área, ya que elimina las señales correspondientes a dos eventos.

Question 35

Qué está observando usted en un gráfico de FSC-H vs. FSC-A?

Answer 35

Se selección una población específica, del gráfico SSC vs. FSC. y se eliminaron los dobles eventos que pasor juntos al lo largo (con FSC-A) como también los que pasaron juntos a loa alto (FSC-H).

Question 36

Si estoy detectando fluorescencia de un pez infectado por un virus, cuál sería su control?

Answer 36

La fluorescencia emitida por el pez sano debe ser tomada como base. Luego, la fluorescencia del pez infectado por sobre la línea base se toma como positiva.

Question 37

Si la fluorescencia es de una molécula x presente en todas las células, cuál debe ser el control?

Answer 37

El control debería ser la muestra sin anticuerpo 1, y con secundario. La fluorescencia del 2 es tomada como línea base.

Question 38

Qué es la extensión Fluorescent Activted Cell Sorter?

Answer 38

Esta extensión sirve para separar las pobalciones celulares según sus características: tamaño (dado por el FSC), complejidad celular (SSC), o bien se pueden marcar con anticuerpos fluorescentes moléculas de superficie (CDs por ejemplo). Luego, se les dá una carga + o -, y las células son enviadas al cátodo o ánodo respectivamente.

Question 39

Qué ventajas tiene un microscopio confocal y uno de campo amplio?

Answer 39

El microscopio confocal nos brinda un examen claro y permite la reconstrucción 3D de muestras gruesas debido a la exploración exhaustiva de diferentes planos en el eje de las Z. Sin embargo, el uso de microscopio confocal puede conllevar mucho tiempo (dependiendo de la velocidad de escaneo). Además, el procedimiento de adquisición de imágenes es más complicado en comparación con un microscopio de campo amplio. Las imágenes confocales solo se obtienen digitalmente desde el detector PMT (la señal observada a través de la lente ocular es en realidad una imagen de campo amplio).

Los microscopios de campo amplio se caracterizan por ser significativamente más baratos que los microscopios debido a que disponen de una óptica menos complicada y una menor demanda de la fuerza de la fuente de luz. La principal ventaja de un microscopio de campo amplio es que permite obtener imágenes de forma rápida y permite observarlas directamente en el ocular. Además, el coste del mantenimiento es bajo en comparación con el microscopio confocal. No requieren tiempos de exposición largos, con lo que son buenos instrumentos para captar objetos en movimiento en la preparación. Pero el ruido den fondo es mayor, por ende la nitidez de la imagen empeora.