3. Fiziologia bacteriana 5. Cultivarea bacteriilor Flashcards
Populația (cultivarea bacteriilor)
= multitudine de indivizi ai unei specii care conviețuiesc într-un anumit biotop
Tulpina (cultivarea bacteriilor)
= populația microbiană ale din descendenții unei singure izolări în cultura pura
Clona (cultivarea bacteriilor)
=este populaţia care rezultă dintr-o singură celulă prin înmulţire vegetativă (diviziune binară).
Bacterii mezofile- temperatura optima
30-37ºC
Bacterii psichrofile temperatura optimă
20ºC
-Ele sunt adaptate la acest mediu prin nr mare de acizi graşi nesaturaţi conţinuţi de membrana plasmatică
Bacterii termofile- temperatura optimă
50-60ºC
- Acizii graşi din membrana bacteriilor termofile sunt acizi grași saturaţi, permiţând membranelor să rămână stabile şi funcţionale la temperaturi ridicate
Bacterii extrem termofile sau hipertermofile - temperatura optimă
80°C sau mai mare şi o temperatură de dezvoltare maximă de 115°C.
Nu sunt patogene.
Bacteriile studiate de microbiologia medicală- ce tip sunt?
Mezofile în marea lor majoritate
Ce raport este între creșterea celulara și volum?
- Creşterea volumului celular raportată la creşterea suprafeţei este mai mare, în cursul creşterii se ajunge la un punct critic.
- Multiplicarea celulară este o consecinţă a creşterii.
Metodele de cultivare a bacteriilor - obiective
- obţinerea unei populaţii microbiene suficiente cantitativ pentru investigaţiile propuse
- prevenirea contaminării produsului cercetat cu un microorganism străin
- izolarea fiecărei tulpini microbiene urmărite în cazul unui produs plurimicrobian în culturi monomicrobiene denumite „culturi pure”.
Ce bacterie nu necesita factori de creștere
E.Coli
Factori de creștere
- Purine si pirimidine: necesare pentru sinteza acizilor nucleici (ADN şi ARN);
- Aminoacizi: necesari pentru sinteza proteinelor;
- Vitamine: necesare în calitate de coenzime şi grupări funcţionale pentru enzime
Tulpini auxotrofe = definitie
Tulpinile mutante care necesită anumiţi factori de creştere ce nu sunt necesari tulpinii din care au provenit
Tipuri de medii de cultura
- medii de cultură simple (agar, apă peptonată, bulion simplu etc)
- medii de cultură mai complexe (agar-sânge, bulion glucozat, agar Muller-Hinton)
Medii speciale
- Mediul electiv conţine ingredientele care convin cel mai bine dezvoltării unei anumite bacterii
- Mediul selectiv inhibă dezvoltarea altor bacterii
decât cea a cărei izolare se urmăreşte - Mediul de îmbogăţire favorizează înmulţirea anumitor bacterii patogene, inhibând dezvoltarea florei de asociaţie dintr-un produs patologic. Funcţionează concomitent ca mediu selectiv şi ca mediu electiv
-Mediul diferenţial conţine un anumit substrat care poate fi sau nu metabolizat, determinând modificarea culorii sau aspectului culturii
Cum se obține colonia izolata?
Coloniile izolate se pot obţine de exemplu prin tehnica însămânţării prin dispersie (cu ansa bacteriologică sau cu tamponul)
Incubare- definitie
= Menţinerea mediilor de cultură însămânţate, în condiţiile necesare pentru dezvoltarea culturii
- timp de apariție mediu= 18-24h
- mycobacterium tuberculosis- timp de generaţie de 12-27 ore şi în acest caz cultura devine pozitivă în 2-8 săptămâni
Tipuri de culturi bacteriene
- discontinue când se realizează în volum limitat de mediu, care nu este reînnoit
- continue atunci când mediul de cultură este continuu reînnoit
Chemostatul- ce utilizează?
utilizează un mediu de cultură în care unul dintre nutrienţi, aflat în concentraţie mai redusă decât ceilalţi, funcţionează ca factor limitant al creşterii.
Care este timpul de generație al unei colonii?
Populaţia care rezultă prin diviziunea unei bacterii creşte în progresie geometrică cu raţia 2. Timpul necesar pentru dublarea populaţiei se numeşte timp de dublare sau timp de generaţie
ex: E.Coli = 20 min, Mycobacterium tuberculosis= 12-27 ore
Fazele dezvoltării unei culturi bacteriene
- Faza de lag - 2 ore
- Faza de multiplicarea logaritmica - 2-3 ore
- Faza staționară - 2-3 zile
- Faza de declin - 2-3 luni
Aspectul culturilor pe medii solide - ce se examinează?
- dimensiunea (coloniile pot fi mari, de peste 2 mm; medii, de circa 1-2 mm şi mici, sub 1 mm),
- conturul (circular, lobat, zimţat),
- relieful (plat, bombat, acuminat, papilat),
- suprafaţa (lucioasă, granulară, rugoasă),
- culoarea (pigmentate, nepigmentate),
- opacitatea (transparente, opace),
- consistenţa,
- aderenţa la mediu,
- prezenţa sau absenţa hemolizei (pe medii de tipul geloză-sânge)
Colonia S (smooth) - caracteristici
- suprafaţă bombată şi netedă
- margini circulare şi adesea aspect strălucitor
- Germenii păstrează structura antigenică şi nu aglutinează spontan cu soluţie salină fiziologică.
- Germenii capsulaţi îşi păstrează capsula
- Virulenţa este conservată
- Majoritatea bacteriilor studiate formează colonii de tip S (S. aureus, S. pyogenes, E. coli etc)
Colonia R (rough)
- este plată, suprafaţa ei prezintă rugozităţi, marginile sunt crenelate.
- Structura antigenică nu este caracteristică.
- Nu păstrează capsula.
- Virulenţa nu este conservată (excepţii Bacillus anthracis, Mycobacterium tuberculosis, Corynebacterium diphteriae).