20 Flashcards
Transgenesis
Modificanion genetica
Introduzco genes de otra especie
GFP
RFP
Para qué transgenicos
Estudio biología básicas: función (desarrollo / Senectud)
Modelo de enfermedad humana
Producción de proteinas recombiantes
Protección ante enfermedades
Intro de nuevas caracteristicas en poblaciones animales
invertebrado
drosospjila
c elegans
vertebrados
pez cebra (danio rerio)
xenopus laevis (rana)
En animales
Animales resistentes a enfermedades (mastitis) (ganado sin proteina prionica)
Biopharming
Produccion de organoos
Modelos enfermedad jumana
Sobretodo ratones
-Bajo costo relativo
-Tiempo corto: Gestacion 21 dias
15 dias de que nace ya puberta
-Metodologia MO desarrollada
-Disponibildad de lineas consagiineas
-Relativa cercania a humanos 110 ma
Otras lineas celulares disponibles
Cerdos
renitis pigmentosa y alzheimer
(perro puede tener tipo de alzheimer por autoinmune)
Conejo
ratas
Dos tipos modificaciones
Inyeccion pronuclear
genetica dirigida
inyeccion pronuclear
inyecto nucleo materiao genetico: mucjas copias del gen
sobreexpresion
Cae aleatorio.
Puede generar localizacion anormal
No tan eficiente
Adicion
Expresion espaciql y temporalmente erronea
(Ekm bipharming) (para hacer ipsc)
Een ratas no exitoso (se trata con lentivirus)
constructo que ibyecto
circular doble cadena
cDNA
promotor
codón iniciador y terminación
reporter gene
poli A (señal stop)
Enhancer: Adn pkegarse que atrae factor transcripción
Se debe eliminar intrones
Modificacion genetica dirigida
Basada en recombinaciom homologa
Una sola copia gen alterado (mutaciones puntualea)
Secuencia hivridable con parte de genoma. se pega a genoma y se pega en sitio corrcto
La puedo hacer condicional en tiempo y espacio
Usos domirigida
Eliminar
remover exones
Añadir genes
Introducir mutaciones puntuales
Inversiones
Translocaciones
Tipo
Permanente
Condiconal
Tiempo (sistema Cre Lox
cómo hacer raton transgenico
Se obtiene mci de blastocisto
Se les hace transgenicas(por electroporacion)
Se elimina a las que no por gen reportero antivioticos (Seguro a traves PCR)
Inyecto en blasrocisto de otro raton
Implanto el embrion quimerico en madre
obtengo hijos quimericos
Cruzo quimerico con negro
Se obtiene heterocigotos pata transgen
Mitad heterocigotos
25 % homocigotos
(puedo probar por qPCR)
Cruzo honocigotos dek transgen y ibtengo completamente transgenicos
ratones mas usados
cepa 129
linea celular facil de establecer
