2 - Culture primaire et lignées cellulaires

Question 1

Que veut dire CMF ?

Answer 1

Calcium and magnésium free.

Question 2

Qu’est-ce qu’une culture primaire ?

Answer 2

Culture provenant d’explants (dérivée d’un tissus intact où d’un tissu dont les cellules sont dissociées enzymatiquement).
Résultat des cellules qui ont eu la capacité de migrer de l’explant ou qui ont survécu aux techniques de désagrégation et qui sont capable de survie.

Question 3

Jusqu’à quel moment une culture primaire est considéré comme une culture primaire et que devient t’elle par la suite ?

Answer 3

Jusqu’à ce qu’elle soit repiquée.

Devient une lignée cellulaire.

Question 4

À quel moment faire les repiquages :

Answer 4

Quand les cellules atteignent une certaine densité, la confluence (manque d’espace).

Question 5

Risque à prendre des cellules directement d’un organisme et piste de solution :

Answer 5

Risque important de contamination, qu’on peut tenter de diminuer en utilisant des composés avec des antibiotiques.

Question 6

Définition de sous-culture/repiquage :

Answer 6

Transfert de cellules d’une culture vers un nouveau milieu pour permettre la prolifération de ces dernières.

Question 7

Définition de lignée cellulaire et caractéristiques :

Answer 7

Population de cellule dérivée de la culture primaire à partir du premier repiquage.
N’implique pas une homogénéité de la population cellulaire ni une connaissance approfondie de cette dernière.
Ces cellules vont proliférer pour une durée limitée.

Question 8

Définition de souche cellulaire :

Answer 8

Population cellulaire définis par certaines caractéristiques (ex : marqueurs, expression de certaines caractéristiques spécifiques).
Un type cellulaire, donc les caractéristiques sont mieux connus.

Question 9

Définition de clone :

Answer 9

Population dérivée d’une seule cellule (constituée de cellules identiques).

Question 10

Avantages d’une culture primaire :

Answer 10

• Plus représentatives des tissus in vivo.
• Elles ont le même Caryotype que le tissu d’origine.
• Cellules différenciés.

Question 11

Désavantages d’une culture primaire :

Answer 11

• Plus difficile à obtenir.
• Plus susceptible d’être contaminés.
• Durée de vie plus courte en culture.
• Elles peuvent ne pas avoir exactement le même comportement que le tissu in vivo (conditions différentes).

Question 12

Les 3 méthodes pour initier une culture de cellules :

Answer 12

1- À partir de la croissance de cellules migratoires provenant d’un fragment de tissu (explant) qui a adhéré à un substrat. Autant en animale qu’en végétale.
2- À partir de cellules provenant de la désagrégation mécanique ou enzymatique d’un tissu. (Séparer les cellules d’un explant).
3- À partir de cellules déjà en suspension dans l’organisme (leucocytes) ou ayant ce pouvoir (cellules cancéreuses).

Question 13

Quel type de cellule ne peuvent pas être cultiver en suspension :

Answer 13

Les cellules adhérentes.

Question 14

Méthode qui donne la population la plus représentative de de qu’on retrouve in-vivo :

Answer 14

Cellules provenant de la digestion enzymatique.

Question 15

Les 3 exigences communes à la culture cellulaire :

Answer 15

 Retirer tous les tissus nécrosés et les graisses lors de la dissection.
 Couper les tissus finement, afin de faire le moins de dommages possibles.
 Retirer les enzymes utilisées pour dégradation immédiatement après leur action (centrifugation).

Question 16

Nommez 4 enzymes qui peuvent être utilisées pour la culture primaire :

Answer 16

Trypsine, pronase, collagénase, dispase.

Question 17

Comment fait-on pour arrêter l’activité de la trypsine ?

Answer 17

Il faut mettre du milieu de culture, puisque celui-ci contient du sérum dans lequel se trouve un inhibiteur de protéase. Si le milieu n’a pas de sérum, ont peut rajouter du soya bean trypsin inhibitor.

Question 18

Pourquoi ajoute-t-on de l’EDTA avec la trypsine ?

Answer 18

L’EDTA chélate les ions de la solution, qui sont nuisibles à l’enzyme.

Question 19

Les différentes procédures pour la dissociation des cellules lors de repiquages (4) :

Answer 19

Brassage.
Racclage cellulaire.
Trypsine.
Dispase.

Question 20

Quand utiliser la procédure de brassage pour la dissociation des cellules lors des repiquages :

Answer 20

Cellules qui font la mitose ou/et qui adhèrent facilement

Question 21

Quand utiliser la procédure de racclage cellulaire pour la dissociation des cellules lors des repiquages :

Answer 21

Lignées cellulaires pour lesquelles les protéases doivent être évitées. (analyse protéines membranaires ou récepteurs).

Question 22

Quel procédures, pour la dissociation des cellules lors de repiquages, convient à une grande variété de lignées cellulaires :

Answer 22

Trypsine.

Question 23

Quand utiliser la dispase pour la dissociation des cellules lors des repiquages :

Answer 23

Récolter l’épithélium en feuillets.

Ne dissocie pas les cellules épithéliales.

Question 24

Critères pour le repiquage :

Answer 24

Densité de la culture.
Détérioration du milieu de culture.
Moment du dernier repiquage.

Question 25

Pourquoi il est préférable d’utiliser du DBSS avec antibiotique lors de la culture primaire ?

Answer 25

Afin de réduire les contaminations, puisque l’animal ou la plante duquel nous prélevons les explants n’est pas stérile

Question 26

Lors de la culture primaire, les cellules font face à des conditions différentes (in vitro), expliquez ces différences :

Answer 26

• Les cellules passent d’un environnement 3D in vivo à 2D in vitro, car elles se retrouvent moins entourées.
• Changements chimiques possibles.
• Interactions cellules-cellules et cellules-matrice sont réduites et le milieu nutritionnel et hormonal est modifié.
• Favorise l’étalement, la migration et la prolifération des cellules peu spécialisées, plutôt que l’expression de fonctions différenciées.

Question 27

Distinction entre changement de milieu et repiquage :

Answer 27

Repiquage = transfert de cellules d’une culture vers un nouveau milieu pour permettre la prolifération de ces dernières. Implique l’élimination du milieu de culture et le détachement des cellules du fond de la boîte (si cellules adhérentes).

Changement de milieu = Simplement retirer le milieu et en mettre un autre. Les cellules restent donc dans le même contentant, contrairement à un repiquage.

Question 28

Expliquer la sélection qui se produit et qui rend la culture plus homogène :

Answer 28

 Les cellules capables de proliférer vont augmenter.
 Certaines cellules vont survivre sans proliférer (tendance à disparaitre).
 Certaines vont mourir.

Question 29

Signes favorables à un repiquage :

Answer 29

Densité de la culture : Les cellules normales devraient être repiquées aussitôt qu’elles atteignent la confluence; sinon, elles prendront plus de temps à se reproduire lorsqu’elles se retrouveront dans une nouvelle boîte.
Les cellules transformées devraient aussi être repiquées lorsqu’elles atteignent la confluence, mais elles poursuivront leur prolifération même si elles ne le sont pas. Cependant, elles vont se détériorer après 2 générations, si elles ne sont pas repiquées.

Détérioration du milieu de culture : Une baisse de pH est habituellement accompagnée par une augmentation de la densité cellulaire. Peut aussi être le résultat d’une contamination.

Moment du dernier repiquage