מעבדה Flashcards
עיקור
הגר כל הצורות הוגטטיביות וספורות
חיטוי/פסטור
הרג של כל הצורות הוגטטיביות
מה מטרת זריעת הבידוד?
ליצור מושבות שהן מחיידק אחד
למה מניחים את צלחות האגר הפוכות?
למניעה של טפטוף אדים על האגר ומריחה של החיידקים
למה מניחים שבקרקע יש מפרקי תאית?
כי יש שמה צמחים שיש שמה תאית
בהוספה של כלורומפניקול בניסוי מפרקי תאית נקבל?
בעיקר פטריות שלא מושפעות מהאנטיביוטיקה הזו
אוטוקלב
עיקור של מצעים רטובים ויבשים על ידי שימוש באדים חמים (טמפ של 121 ל 20 דקות )
למה משמש עיקור בחום יבש להבה?
עיקור של חומרים יבשים כמו לולאה
למה משמש עיקור UV
למשטחים היא קרינה חלשה יחסית
למה גורמת קרינת UV
שימרים של פרימדינים וכתוצאה מכך למוטציות ב דנא
איך מתוקנים נזקים של UV ?
לחלק מהמיקרואורגניזמים יש אנדונוקלאז שהוא עושה הידרוליזה לבסיסים ואז יש השלמה שלהם על ידי דנא פולימרז
אילו סוגי קרינה יש חוץ מ UV?
אלפא ,בתא וגמא והן בעלות אנרגיה גבוהה
מה הנזקים של קרינות אלפא בתא וגמא?
הן קרינות מייננות , חודרות וגורמות לרדיקלים שמסוגלים לפרק ולשנות דנא וחלבונים
מי דורש יותר קרינה כדי להרוג?
גרם חיובי שעושה אנדוספורות
דיזנפקט
חומר המשמש רק לחיטוי של כלים או משטחים כי הוא רעיל לאדם
אנטיספט
משמ לחיטוי חיצוני באדם ובבעלי חיים
אתילן אוקסיד
חומר חיטוי כימי שאחרי החיטוי איתו נשארים עקבות שלו ולכן צריך להיזהר ( הוא רעיל)
איך מעקרים מצעים שלא ניתן לעקר?
על ידי סינון עם ממברנת צלולוז .
מצע מוגדר
מכיל מצעים ידועים בכמויות ידועות
מצע העשרה
נותן עדיפות לחיידק מסויים לגדול עליו
מצע מבחין
לדוגמא הוספה של אנטיביוטיקה שנותנת רק לחיידקים העמידים לה לגדול
מה הם היתרונות בשימוש בגלטין כמצע ?
חומר נקי
מה הם החסרונות בשימוש בגלטין כמצע ?
בעל נקודת רתיחה וקרישה נמוכה וחיידקים מפרקים אותה
מה החסרונות בשימוש באגר כמצע?
אגר בדרך כלל לא נקי ומכיל עקבות של מזון . ניתן להשיג נקי אבל הוא יקר
מה ההיתרונות בשימוש באגר כמצע ?
מרחק גדול בין נקודה קרשיה ורתיחה כמעט אינו מותקף על ידי מיקרואורגנזמים
איך נוצרת מושבה סדירה ?
נוצרים בדרך כלל על ידי נקדים
איך נוצרת מושבה לא סדירה ?
בדרך כלל על ידי מתגים
איך נוצרת מושבה רירית ?
על ידי סינטזה של פוליסכרידים שבדרך כלל מרכיבים את הקפסולה
מה הקשר המורפולוגי של מושבות חלקות או מחוספסות?
יש קשר להבדל במבנה הדופן ונוכחות או העדר של קפסולה
איך נוצרת מושבה עם מפרצים ?
נוצרות בדרך כלל על בגלל אי הפרדה של חיידקים לאחר החלוקה
האם מורפולוגיה של חיידק תישאר קבועה ?
לא ! לפי תנאי הסביבה היא יכולה להשתנות
כושר הפרדה
היכולת להבחין בפרטים במיקרוסקופ זה עולה עם ההגדלה עד גובל מסוים
כושר הפרדה -מרחק מינמלי בין שתי נקודות המאפשר להבחין כי הן שתי נקודות נפרדות
האם כושר ההפרדה נמצא ביחס הפוך לאורך הגל?
כן
מיקרוסקופ אור
משמש להסתכלות על מיקרו מקובעים
מיקרוסקופ פאזות
מאפשר הסתכלות על חיידקים חיים
עיקרון קונטרסט פאזות
ניתן להגדיל את הניגוד בין עצם לרקע שלו על ידי התאבכות גלי אור
למה קשה לראות חיידקים במצע נוזלי?
מקדם השבירה שלהם ושל המצע דומה מאוד
cytophaga
מתג כפוף ,מפרק תאית ,גרם שלילי בעל תנועת גלישה .רובן אירובית
cellvibrio
מתג גרם שלילי ,התאים מייצרים פיגמנט צהוב /חום
cellulomonas
מתגים כפופים ופולימורפיים
קלסטרידיום
מתגים ארוכים בעלי אנדוספרות מפרקים תאית לחומצה אורגנת ,אתול מימן ופדח בתנאים אנאירובים
גרם חיובי
גורמים המשפיעים על פירוק תאית
כמות חנקן , אוויר,לחות ,חומציות
באילו תנאי חמצן פירוק התאית הכי יעיל?
אירובי
שלבי צביעת גרם
פיקציה יבוש באוויר סגול גלוציאן+לוגל שטיפה בכהל שטיפה במים צביעה בפוכסין שטיפה במים
גרם חיובי יצבע ב
סגול
גרם שלילי יצבע ב
אדום - ורוד
מה תפקיד הפיקציה בצביעת גרם?
למנוע ירידה של חיידקים בזמן שטיפה ולהפוך א תהממברנה לחודרנית יותר
למה מייבשים באוויר?
למניעת רתיחה של הנוזל שבו מורחפים החיידקים דבר שיוביל להתפוצצות
תפקיד הלוגל ( יוד)
ליצור קומפלקס עם הסגול גאוציאן ולהגדיל א תהמטען השלילי ולאפשר בכך קשירה חזקה יותר של הצבע
מה תפקיד השטיפה ב כהל ?
דהידרציה של הפפטידוגליקן וסגירה שלו . בכך בגרם חיובי נלכד הסגול ובשלילי בגלל שהדופן דקה יש יציאה שלו
מה המטרה של צביעה בפוכסין?
זהו צבע בסיסי שנקשר לחלבונים וצובע את כל הגרם שלילים שהסגול נשטף מהם
מה הבעיות בשיטת קוך?
לא תמיד אפשר לבודד את החיידק במעבדה , תסמינים שלח אותה מחלה הם שונים בחיות שונות, לא כל מחלה באם מדביקה חיות אחרות ולכן בשביל זה או צריך לעשות ניסויים בבני אדם או לא לעשות בכלל
בעקרונות קוך איך אפשר לדעת שזו אותה מחלה אחרי ההשתלה של החיידק?
הופעה של אותם תסמינים
איזה גרם אי קולי?
שלילי
איזה גרם בצילוס ?
חיובי
האם על ידי צביעת גרם אפשר לזהות את החיידק ?
לא
האם על ידי מורפולוגיה אפשר לזהות את החיידק ?
לא . אם רק זה באותו המצע אז אפשר להניח שזה אותו חיידק אבל לא לדעת
CFU
ספירת יחידות יוצרות מושבות
ספירה לא ישירה
מתי לא מגיע שלב הlag?
כשהחיידקים רגילים למצע
מה מעריך את שלב ה lag?
המצב הפיזי של החיידקים ואופטימליות המצע בשבילהם
למה ניתן לחשב את זמן הדור רק מציר חצי לוגרתמי?
כי אז השלב האקספוננציאלי הוא ישר
למה נצייר את גרף הגידול בציר חצי מעריכי?
כי שמה יש הגדלה של הבדלים קטנים והקטנה של הבדלים גדולים ואפשר לראות בבירור את שלבי הגידול של החיידקים
האם יש גידול בשלב הסטציונרי?
יש חלוקה אבל הנטו של החיידקים מתים-חיים לא משתנה
מה גורם לשלב התמותה ?
חוסר מזון , הפרשה של מטבולייטים משניים של החיידקים שגורמים לשינוי התנאים לתנאים פחות אופטימלים
מה גורם לירידה האופטית בשלב התמותה ?
ליזיס של החיידקים המתים
הא ניתן למדוד בצורה אופטית את כמות החיידקים בשלב הסטציונרי .?
לא
איזה גרם לקטובצילוס?
חיובי
איזה גרם סטרפטקוקוס?
חיובי
איזה חיידקים היו בלבן?
סטרפטקוקוס
איזה חיידקים היו ביוגורט ?
סטרפטקוקוס ולקטובצילוס
תא ספירה
ספריה ישירה באמצעות מיקרוסקופ בתא מיוחד לכך שנפחו ידוע. שיטה שמקובלת למיקרו גדולים
מתי שיטת הספירה לוקה בחסר ?
באורגניזמים היוצרים אגרגטים/תפטיר כמו פטריות ,אקטינומצטים וחיידקים
תפטיר
צורת גדילהשל פטריה
הערכה כמותית על ידי שקילה
כדי להתגבר על הבעיה של אגרגטים אפשר לעשות משקל יבש של המיקרו
אנליזה כימית או ביוכימית
אנליזות של ח.גרעין , תהליכים מטבולים ועוד . עליה בהם היא עליה בכמות המיקרו
מדידת עכירות
צריך לזכור לעשות החסרה של מצע הגידול
אורכי גל 540-600 ננו מטר
מדידה של עיכורת מתורגמת לכמות חיידקים
באיזה שלבי גידול אפשר לעשות מדידת עכירות לקבלה של תוצאות נכונות לכמות החיידקים?
שלב לג ושלב אקספוננציאלי
מה הטעות שיש בצלחות עם מיהולים גבוהים?
יש צפיפות גבוה יותר של חיידקים ככל שיש מיהול קטן יותר שזה יצור צפיפות ולא יהיה ניתן להניח שחיידק אחד יצר מושבה אחת
באיזה צלחת יש לספור את המושבות ?
בצלחת שיש בה בין 20 ל 200 מושבות
חסרונות של שיטת המיהולים
לא כל חיידק יכול לחיות על מצע גידול במעבדה
יש חיידקים שגדלים באגרגטים ולכן אי אפשר להניח שמקור מושבה הוא מחיידק בודד לכן היחידה היא cfu
מה הם השלבים להכנה לPCR
הכנסה של מושבה לאפנדורף עם מים מזוקקים וחימום במאה מעלות לליזיס של התא
ואז לשים את החלק העליון שנוצר במחבנה באפנדורף עם הביסיסים הפולימרז ונוזל לניסוי
למה לוקחים את החלק העליון של המבחנת ההכנה לPCR ?
כי שמהזה בלי שאריות התאים ששקעו
מההיא הביקורת החיובית בPCR?
דנא עם הפריימרים
מה נצפה מהבקרה החיובית?
היא כדאי לראות שההרצה באמת עובדת ששאין תקלה בפולימרז או בתנאי ההגברה . נצפה לראות פס של הדנא שאנחנו נבודד
מה היא הבקרה שלילית בPCR?
רק תמיסה של ההרצה ללא הדנא
מה נרצה לראות בבקרה השלילית ?
שאין הברה ככה נשלול זיהום
במה טעונות מולקולות הדנא?
מטען שלילי
איך עובדת הרצה בגל אלקטרו פורזה ?
יש תנועה של חומרים טעונים שלילית לעבר הקטב החיובי , זוהי הפרדה לפי גדול , הקטעים הקטנים יותר יהיו קדימה יותר .
לאן מוסיף הדנא פולימרז את הנוקלאוטידים?
לגדיל 3
שלבי ה PCR
דנטורציה של ה דנא
שלב איחוי של הדנא עם הפריימרים
הארכה
מה יש בשלב הדנטורציה ?
צריך בערך 95 מעלות כדי לעשו תדנטורציה לגדילי ה דנא שהפולימרז יוכל לבוא לשעתק אותם .
(לצורך הפרדה של קשרי מימן בין הגדילים)
מה יש בשלב האיחוי?
ירידה ל 65 מעלות לאיחוי של הפריימרים
הטמפרטורה קשורה לכמות קשרי ה G-C
לא נרצה להוריד את הטמפרטורה יותר מידי שלא יהיו קישורים לא ספציפים
מה יש בשלב הארכה ?
עליה ל 70 מעלות
משך השלב הזה נקבע לפי אורכו של הדנא
למה במים מנרלים יש הרבה חיידקים?
כי יש שמה פחות כלור
azotobacter chroococcum
חיידק מקבע חנקן אטמוספרי ,אירובי גרם שלילי הוא יוצר ציסטות
קלסטרידיום
קושר חנקן אנאירובי
azospirillum
מקבע חנקן אטמוספרי אירובי
ריזוביום
חיידק סימביוטי עם קטניות שמקבע חנקן
מה עושים חיידקים מקבעי חנקן אטמוספרי?
לוקחים חנקן חופשי הופכים לאמוניה ואז לחמקן אורגני
איך מגדלים מקבעי חנקן?
רק על מצע בלי מקור חנקן כי זה תהליך אנרגטי ממש
איזה מקור פחמן צריך למקבעי חנקן אטמוספרי?
פחמן אורגני
אמונופיקציה
נדרש חמצן לתהליך
הפיכה של חומרים אורגנים מכילי חנקן לאמוניה
יש בצילוסים ואקטנומצטים שעושים את זה
זהו תהליך שמגביל יותר לפוטוסינטזה מאשר נשימה
ניטריפקציה
אמוניה שהופכת בלשלב ראשון לניטריט על ידי ניטרוסומס ובשלב שני לניטראט על ידי ניטרובקטר
תנאים לניטריפקציה
אירובי
אמון/אמוניה כמקור פחמן
העדר פחמן אורגני
דה ניטריפקציה
ניטראט יכול לשמש כמקבל אלקטרונים סופי בתהליך נשימה
הפיכה של ניטראט לניטריט או לחנקן אטמוספרי
תנאים לדה ניטריפקציה
אנירובי
מקור פחמן אורגני
חיזור ניטרט לאמוניום
החנקן משמש לנשימה כמו בדה ניטריפקציה אבל נשאר זמין במערכת
חיזור של ניטראט לאמוניום בתנאים אנארובים
חיזור ניטראט אסימולטורי
בתנאים אירובים ניטראט נקלט על ידי חיידקים ,פטריות וצמחים והופך לאמוניה ואז החנקן משמש לביוסינזה וחיזור הניטראט
ANAMMOX
מתרחש באוקיינוסים וגופי מים אחרים
ניטריט ואמוניה הופכים לגז חנקן
נעשה על ידי פלנקטומיצטים
אמוניה משמש כמקור אלקטרונים והינטריט כמקבל
איך נראה פעילות קטאלז?
טפטוף מי חמצן ונראה בועות
איך נראה פעילות של עמילאז?
טפטוף של לוגל
ליד חיידק שמפרק עמילן לא יהיה קישור של לוגל אליו ולא יהיה קומפלקס סגול
אריטרואצין
גרם חיובי
סינטזה של חלבונים
סטרפטומיצין
פוגע בגרם שלילי
משפיע על סינטזה של חלבונים
פנצילין
פוגע בגרם חיובי
פוגע בסינטזה של דופן התא