מבוא להיסטולוגיה Flashcards
ממה מורכב מיקרוסקופ
- זוג עדשות דרכן אנו מסתכלים
- ממערכת של עדשות עצם בגדלים שונים המגדילות את
העצם המונח תחתן בצורה מתאימה. - עדשה המרכזת את האור
- מקור אור- עובר דרך העדשה שמרכזת אותו, דרך העצם
אל עדשות העצם ואל עדשות העין. - מערכת של ברגים לכיוון העדשות.
מה זה כושר הפרדה ומי קובע אותו במקרוסקופ
המרחק הקטן ביותר בין 2 עצמים המאפשר
לראות אותם כתמונות נפרדות. כושר ההפרדה נתרם ע”י עדשת העצם בלבד.
איך מחשבים כושר הגדלה של מיקרוסקופ
מכפלת שיעור הגדלת עדשת העצם בשיעור הגדלת עדשת העין.
מהו גבול ההפרדה של מיקרוסקופ אור
0.2 מיקרון
אבל תכלס רואים פחות טוב מזה
שלבי הכנת תתקין בכותרות
קיבוע = FIXATION
דהידרציה = DEHYDATION
הטבעה = EMBEDDING
חיתוך במיקרוטום
פריסה
REHYDRATION
צביעה
מה זה שלב הקיבוע מהו החומר הנפוץ ביותר
לקיבוע ואיך הוא עובד
מה לא יעבור קיבוע
תהליך של שימור וייצוב מבנים ביולוגיים ועצירת תהליכי פירוק ברקמת התתקין
שתי אפשרויות קיבוע - פורמלין והקפאה
החומר הנפוץ ביותר זה פורמלין והוא גורם לקשרים בין חלבונים (ספציפית בפורמלין זה
בין ליזינים) ולקיבוע של כל מה שהיה קשור אליהם
בנוסף, פורמלין מחטא את הרקמה ועוצר את כל תהליכי החיים ומעבר חומרים
סוכרים ושומנים לא עוברים קיבוע גם לא מטבוליטים קטנים, tRNA , יונים ,
הסבר על שלב האמבדינג/הקפאה
מה מטרתו
תכונות פרפין ו
JB4
שלב הקשיית הרקמה לקראת החיתוך שלה
הרקמה מועברת לתמיסת פרפין או
JB4
פרפין -
שעווה. זול, מוכר מותך בטמפרטורה נמוכה ולכן לא גורם נזק גדול לרקמה
JB4 -
חומר פולימרי קשה איתו אפשר לחתוך פרוסות דקות יותר
לא צריך בו את שלב הדהידרציה
דרך נוספת ומהירה יותר היא הקפאת הרקמה מיד לאחר הוצאתה מהגוף. ההקפאה משמשת גם לקיבוע הרקמה וגם להקשייתה. שיטה זו מהירה מאד, ומשמשת בעיקר לבחינת ביופסיות בעת ניתוחים, או כאשר רוצים לבדוק מולקולות שאינן עוברות קיבוע כימי, אך התתקינים המתקבלים ברורים פחות מאלה שבקיבוע כימי ובהטבעת פרפין, ואורך חייהם קצר יותר.
הסבר על שלב ה
DEHYDRATION
שלב בו המרכיב המימי של הרקמה מוחלף בממס אורגני ע”י העברה מדורגת לתמיסות בריכוזים עולים של אלכוהול.
מאפשר כניסה של פרפין לתוך הרקמה
הסבר על חיתוך במיקרוטום
המיקרוטום הוא מכשיר חיתוך מדויק ביותר, החותך את בלוק הפרפין לפרוסות עוקבות, בעובי הניתן לכיוון. עוביים הממוצע של חתכים היסטולוגיים
נע בין
4 - ל8 µm
אך ניתן לפרוס את הרקמה גם לחתכים שעוביים
כ- 1 µm
(לשם כך משתמשים בבלוקים היצוקים ב
-JB-4).
הסבר על שלב הפריסה
אחרי החיתוך במיקרוטום חתכי הרקמה הנתונים בפרפין נפרסים על אמבט מים חמים, על מנת שניתן יהיה להניח אותם, ללא קיפולים, על זכוכית נושאת.
הסבר על שלה הרהידרציה
בשלב זה החומר האורגני (פרפין) שבו נתונה הרקמה מוחלף חזרה במים, כדי להכין את הרקמה לצביעה. החתך מועבר ל
-xylene,
הממיס את הפרפין, ואחר כך
לתמיסות בעלות ריכוזים הולכים ויורדים של אלכוהול, עד למים, בתהליך הפוך ל-Dehydration
הסבר על שלב הצביעה
התהליכים שבוצעו על הרקמה הפכו אותה כמעט לשקופה לכן יש לצבוע אותה ע”מ להבחין במרכיבים השונים
מה זה צביעת
H&E
Hematoxylin & Eosin
אאוזין הוא חומר חומצי שצובע בוורוד אדום חומרים בסיסיים כמו ציטופלזמה, מיטוכונדריה וסיבי קולגן והמטוקסילין חומר בסיסי שצובע בסגול כחול חומרים חומציים כמו חומצות גרעין וריבוזומים
מה זה צביעת
TRICHROME
קבוצה של שיטות צביעה שנועדו לציין את מיקומה של רקמת החיבור ושל סיבי הקולגן שבה, ומסייעות להבחין בין רקמת חיבור צפופה לבין רקמת שריר חלק
גרעיני התאים ותאי הדם האדומים נצבעים באדום, השרירים באדום-כתמתם וסיבי הקולגן בירוק.
מהי צביעת
PAS
מיועדת להדגמת נוכחות סוכרים (מולקולות סוכר או שיירים סוכריים במקרומולוקולות, כדוגמת גליקופרוטאינים). לפיכך הצביעה משמשת להדגמת נוכחות
basement membrane, external lamina
ריר ומשקעי גליקוגן בתאים, ו
glycocalyx
על פני התאים.
