ח. אמינו - שיטות הפרדה Flashcards
על פי אילו מאפיינים מפרידים חומצות אמינו?
מטען
גודל
מסיסות
אינטראקציה ספציפית
אילו שיטות משמשות להפרדה ע”ס מטען?
אלקטרופורזה
מחליף קטיונים / מחליף אניונים
Isoelectric focusing
מה החסרון של כרומטוגרפיה על מחליף יונים?
לא יעילה על חומצות אמינו א-פולריות
מה החסרון של אלקטרופורזה?
לא יעיל להשתמש בשיטה זו כדי להפריד בין ח”א עם מטען דומה
מה זה
Isoelectric Focusing
צינורית שבתוכה גרדיאנט pH, מחומצי לבסיסי. מכניסים תמיסת חלבונים / ח”א ומפעילים שדה חשמלי
אילו שיטות משמשות להפרדה ע”ס גודל?
דיאליזה
ג’ל נטיבי ???
SDS-PAGE
Gel filtration
אילו שיטות משמשות להפרדה ע”ס מסיסות?
Salting in – salting out
Thin layer chromatography
אילו שיטות משמשות להפרדה ע”ס אינטראקציה ספציפית?
Affinity chromatography
ג’ל נטיבי - מה זה?
הפרדה משולבת לפי גודל ומטען – לא טוב!
טוענים תערובת חלבונים בג’ל וסוגרים מעגל. חומרים טעונים שלילית ירוצו לאנודה. גם חומרים קטנים ירוצו מהר ורחוק.
אבל הפסים שהתקבלו הופרדו על סמך מטען או גודל? אין לדעת…
SDS-PAGE?
דומה לג’ל נטיבי אבל מערבבים את הסדס לתערובת החלבונים כך שכולם נטענים שלילית. מטייב את שיטת הג’ל ויצר הפרדה ע”ס גודל בלבד
SDS – חומר טעון שלילית. מאזן כל מטעני כל החומרים.
Gel Filtration?
הפרדה בקולונה ע”ס גודל
סדר היציאה יהיה מהגדול לקטן
Salting in/out?
העלאת והורדת ריכוז מלח, לרוב אמוניום סולפט 30%, גורמת למשיכת מים לכיוון המלח, להתגבשות החלבון ולשקיעתו.
TLC - Thin Layer Chromatography
שמים דף סיליקה בממס הידרופילי/הידרופובי והחומצות עולות בנימיות
החומצה האמינית המסיסה ביותר תעלה הכי גבוה
יעני בממס הידרופילי החומצה ההידרופילית ביותר תעלה הכי גבוה כי היא גם המסיסה ביותר
Affinity chromatography
בקולונה טוענים את הפאזה הנייחת בנוגדנים ספציפיים, אנטיגנים ספציפיים או אנזים ספציפי לחומר מסוים. מריצים תערובת. רק החומר הספציפי ייקשר. השאר יישטף מטה. לאחר מכן צריך “לשחרר” את אותה המולקולה מהקולונה.
