Tecnicas histologicas Flashcards
Enumere los pasos de la tecnica de Rutina y la principal función de cada
1) Obtención de la muestra
2) Fijación: preservar la estructura y ultraestructura del tejido
3) Inclusión: aportar rigidez al tejido para que se pueda cortarlo. Se usa parafina.
4) Corte: se usa un micrótomo
5) Coloración: con Hematoxilina (Basófila) y Eosina (Acidófila)
6) Montaje: poner una película para la protección del preparado
Describa cada paso de la técnica de rutina:
1) Obtención de la muestra: Por Biopsia (organismo vivo) o Autopsia (necropsia - organismo muerto)
2) Fijación: Visa preservar la estructura y ultraestructura evitando autolisis, contaminación y la aparición de estructuras no deseadas.
Puede ser via calor, frio, congelación. O quimicamente con formol (es el metodo de rutina), alcohol metílico (fija proteínas) y tetróxido de osmio (fija grasa, mielina y fibras).
3) Inclusión: incluir la muestra en sustancias que le concedan firmeza suficiente para el corte en micrótomo.
a) Deshidratación: hay que eliminar el agua lentamente para evitar que haya la retracción del tejido. Se pasa la muestra por concentraciones crecientes de alcohol (50%, 70, 80%, 96%, 100%).
b) Aclaración: Se sumerge el tejido en un solvente orgánico (Xileno) que elimina el alcohol y demás residuos. El xileno ayuda que la parafina infiltre en el tejido. El tejido se vuelve translúcido.
c) Inclusión en parafina: Se usa parafina para endurecer el tejido.
4) Corte
5) Coloración: Visa impregnar el colorante con el objeto de estudio. El colorante es hidrosolube por eso hay que retirar la parafina y rehidratar el tejido.
a) Desparafinización/Aclaración:
Se sumerge la muestra en xilol para retirar la parafina. Se pierden lípidos de almacenamiento del tejido en esa fase.
b) Rehidratración: Se pasa la muestra en concetraciones DECRECIENTES de alcohol (100%, 96%, 80%, 70%, 50%) y luego agua destilada.
c) Coloración: Primero se colorea con HEMATOXILINA. Al transcurso de 3 min se lava el portaobjetos con agua corriente y luego sumerge con EOSINA para concluir la tinción.
6) Montaje: Poner una película de protección del preparado.
a) Deshidratación: sumerge el preparado en concentraciones crecientes de Etanol
b) Aclaración: se utiliza xilol para diluir la resina adhesiva usada para pegar el cubre objeto y por lo tanto los lípidos se impregnen de manera correcta al tejido.
c) Montaje final: se aplica una gota de Bálsamo de Canadá (pegamiento) y inmediatamente se deposita una delgada lámina de vidrio denominada CUBREOBJETO sobre la sección evitando la formación de burbujas de aire.
Fundamento de la técnica de rutina:
Es la interacción entre cargas de un colorante y su respectivo sustrato.
Un colorante básico va a interactuar con sustancias ácidas. Mientras que un colorante ácido va a interactuar con sustancias básicas.
El colorante Hematoxilina (básico +) va a colorear:
Va a colorear de azul-violeta sustancia de carga negativa (ácidas), denominadas BASOFILAS como el núcleo (ARN y ADN), Retículo Endoplasmático Rugoso, moléculas con grupos sulfatos y extracelular los GAG’s (Glicosaminoglicanos) …
El colorante EOSINA va a colorear:
Va a colorear de rojizo o rosado sustancias de carga positiva denominadas Acidófilas, como las proteínas. Citoesqueleto, mitocondrias, lisosomas y vesículas de secreción proteica, fibras de la Membrana extracelular.
Basófilia
La afinidad del sustrato por un colorante básico
Acidófilia
La afinidad del sustrato por un colorante ácido.
En que paso de la técnica de rutina hay la pierda de lípidos?
En la Coloración en el subpaso Aclaración. Que es cuando se sumerge la muestra en Xilol (un solvente organico) para retirar la parafina.
Que dos macromoléculas no se pueden ver usando la técnica de Rutina y cuales se pueden.
Se pueden ver los sustratos que tengan carga, visto que el fundamento de la técnica es la interacción entre las cargas del colorante y el sustrato.
Ácidos nucleicos (-) y proteínas (+) tienen carga y por lo tanto pueden ser visualizados, mientras que hidratos de carbono y lípidos no tienen carga y por ende no pueden ser visualizados.
En la tecnica de PAS, el reactivo de Schiff se tinge magenta?
Falso. El reactivo de Schiff no tiene color por si propio. El color se manifesta por la reacción.
Ejemplos de colorantes ácidos
(rojizo o rosado)
-Eosina
-Naranja G
-Fucsina Ácida
Ejemplos de colorantes básicos
(azulado violeta)
-Hematoxilina
- Azul de toluidina
-Azul de metileno
-Verde de Metilo
Ejemplos de colorantes metacromáticos
(cambian de azul a rojo, púrpura)
-Azul de toluidina
-Azul de metileno
-Metil violeta
-Tionina
Tipos de Sudán
(colorean lípidos)
-Sudán Black B (negro)
-Sudan III (rojo escarlata)
Que se visualiza con Sudán?
-Inclusiones de lípidos en células de la corteza suprarrenal
-Tejido adiposo uní o multilocular (múltiples cavidades)
En la fijación de lípidos se va a usar fijadores especiales o congelación (debido a que se pierden los lípidos en la técnica de rutina).
Para el corte se va a usar un Criostato en vez de un micrótomo.
