komórki ssacze Flashcards
zalety komórki ssacze
pełna obróbka potransacyjna, glikozylacja
wady ssacze
droga, trudna hodowla, kom nizdolne do holdowli w dużej gęstości, wolny wzrost, ryzyko zakażenia wirusem
linia CHO
nie da się zakazić wirusem - są bezpieczne ale inna glikozylacja bez kw. sjalowego
BHK
mogą rosnąć w dużej gęstości, nie wymagają surpwicy, która wprowadza zmienność
NSO, Sp2/0
mysie, różnice we wzorze glikozyclacji
HEK 293
ludzkie, łatwo trafnsekowane
metody wprowadzanai materiału gen fizyczne
elektroporacja - wydajna ale duża śmiertelnosć
mikroiniekcja i pocisiki genowe - szybkie, proste, duża śmiertalność
metody wprowadzanai materiału gen chemiczna (4)
precypitacja z fosforanem wapcnia, transfrkcja z użycoem polimerów - tanie, skutecznie, toksyczna
lipofekcja - łatwe, wydajne, najdroższe
dendrymery
ogólnie to tworzą kompleksy z dna i ułatwoją wniknięcie
metody wprowadzanai materiału gen wirus
adenowirusy, vaccica, bakulowirusy znodyfikowane żeby mieć promotory ludzkie
Transfekcja przejściowa
najszybszy, najprostszy, wydajny sposób, ale produkcja trwa przez ograniczony czas po transfekcji, duże ilości białka. Nie trzeba prowadzić długotrwałej hodowli, stąd mniejsze ryzyko zakażenia wirusowego. kosztowną.
Stabilne transformanty-
integracja liniowego DNA z genomem gospodarza, wektor z czynnikiem selekcyjnym. Zaletą jest uzyskanie długotrwałej, stabilnej linii komórkowej, produkującej białko na odpowiednim poziomie. Zachodzi konieczność przeprowadzenia selekcji klonu o pożądanych właściwościach, jako że większość otrzymanych klonów produkuje białko nieprawidłowe lub w niewielkich ilościach