Flow Cytometrie Flashcards
Was bedeutet Flow Cytometrie?
Was ist der Vorgänger der Flow Cytometrie?
Coulter-Zähler
Wie funktioniert der Coulter-Zähler?
Änderung des gemessenen elektrischen Stroms ist proportional dem Partikelvolumen bei Durchgang durch die Filteröffnung.
Was für Proben kann man mit der Flow Cytometrie messen?
Einzelne Zellen in Lösung
(Keine Gewebe, nicht intrazellulär)
Welche zwei Eigenschaften lassen sich mit Flow Cytometrie messen?
-> Welche Winkel?
Forward Scatter (FSC)
Side Scatter (SSC)
Was bestimmt man mit Forward Scatter (FSC) und Side Scatter (SSC)?
FSC: Proportional zur Größe der Zelle
SSC: Proportional zur Granularität
Wie wird verhindert, dass beim FSC der Laser nicht direkt auf den Detektor trifft?
FSC gegen SSC
-> Wo befinden sich apoptotische, tote und lebende Zellen?
Beschreibe die Größe und Granularität:
Lymphozyten
Monozyten
Granulozyten
Lymphozyten: Klein, wenig Granularität
Monozyten: Groß, wenig Granularität
Granulozyten: Groß, hohe Granularität
Beschreibe die Fluoreszenz mittels Jablonski Diagram
Wie nennt man den Energieunterschied zwischen absorbierten und emittierten Photon?
Stokes Shift
Wovon ist die Intensität der Fluoreszenz abhängig?
Fluoreszenz ist proportional zur Anzahl an Fluoreszenzmolekülen
Das sheath fluid besteht aus was?
PBS mit Stabilatoren
Wo wird die Probe bei der Flow Cytometrie eingeführt?
Sample Injection Port (SIP)
Auf welchem Prinzip beruht Flow Cytometrie?
Hydrodynamic Focusing: Zwei Flüssigkeiten, die sich entweder in Dichte oder Geschwindigkeit unterscheiden lassen sich nicht mischen.
Wie nutzt man hydrodynamic focusing bei Flow Cytometrie?
Sheath Fluid in großer Geschwindigkeit.
Nutze diese Flüssigkeit und keine Glaskapillare, da eine so kleine Kapillare nicht herstellbar wäre.
Wo findet man ein Beispiel für hydrodynamic focusing in der Natur?
Treffen zwischen Rio negro und Amazonas
Wie hoch ist die Flow Rate (μl/min) der niedrigen, mittleren und hohen Flow Cytometrie und wie viele Zellen werden pro Sekunde gemessen?
Woher kommt der Laser für Flow Cytometrie und wie wird er fokussiert?
Ursprung aus fiber-optic cable, oder auch Glasfaser genannt.
Nutze Prisma und Linsen um den Laser auf die Probe zu fokussieren.
Wie wird der Laser, der die Probe trifft zum Detektor transportiert?
Laser trifft auf Probe und Fluoreszenz Strahlung wird im 90° Winkel abgestrahlt.
Fluoreszenz Strahlung wird mittels Linsen auf Laser focal points gebündelt und auf individuelle collection fibers übertragen.
Zeige wie Fluoreszenz Strahlung mittels Linsen auf Laser focal points gebündelt und auf individuelle collection fibers übertragen wird.
Wie werden die Fluoreszenz Signale im Detektor voneinander isoliert?
Nutze dichroitische Spiegel: Bestimmte Wellenlängen können passieren, andere Wellenlängen werden reflektiert.
Wie wird das Lichtsignal detektiert?
Nutze Photoelektrischen Effekt, d.h. Photonen regen Elektronen an, die aus dem Metall herausgeschlagen und dann Richtung Dynode beschnleunigt werden. Dort werden sie weitere Elektronen herausschlagen und eine Kaskade (Photomultiplier) verursachen.
Im Photomultiplier treffen Elektronen auf die Anode und verursachen ein Signal.
-> Wie sieht dieses Signal aus?
-> Was wird entfernt?
Beim Passieren der Zelle durch den Laser wird eine Spannung (Volt) gegen die Zeit gemessen (Wie beim Coulter-Zähler). Dabei wird das Integral des Graphen gemessen.
Doppelsignale durch Zellklumpen werden entfernt!
Wie wird das Integral der Fläche unterhalb des Voltsignals in ein Computersignal umgewandelt?
Nutze einen Analog-zu-digital converter (ADC)
