Derivatizacije Flashcards
CNBr, uslovi i reakcija
CNBr u acetonitrilu, matriks u H2O pH 10,5-11 komtinualno ispirane Ligand u kuolujućem puferu Blok Tris pH 8 Ispiranje pH 4 pH (3-11) Mane: curenje liganda, reverznost
BisOxiran, uslovi i reakcija
Rastvara se u 50% DMF ili doksanu c= 10 mg/mL Matriks u H2O sve na ph 9-11, 25-40 stepeni,16h BLOk 1M etanolamin 4 h 40 stepeni pH (2-14) Ne sme Tris! \+8 čuvanje ZA MALE LIGANDE (šećeri, holin)
TsT uslovi i reakcija
Tst u dioksanu ili acetonu Matriks do dioksana TERCIJARNI AMIN ZA HCl Sve na ph 8 i 50 stepeni 1h Kuplovanje sa ligandom na pH 8, bodena sredina, st
Glutaraldehid uslovi i reakcija
ANTITELA Ide kao 10% Za NHS aktivirane, 2h ST Ispiranje Ligand u kuplujućem puferu pH 8,3 2h st BLOk 1M etanolamin sa NaCl pH 8.3 stab (3-10) i 0-40 stepeni Čuvanje u PBSu pH 7.2 sa 0.02%azidom
Epohlohidrin
Da li mou proteini?
pH?
Samo glikozilivani!fenoli, amini
pH 12
perjodat 0.01M
antitela i lektin, GLIKOZi, BLAGI USLOVI
Prvo oksidacija polisaharida Ispiranje Ligand pH 8 PBS 20h Redukcija u 1% NaBH4 Ispiramje Acetatni oH 4
Stabilan u kiselijim uslovima
CDI karbodimidazoč
dioksan ili?
AMTITELA NK dioksan 8,5-11 4-25 stepeni minimum 6h Najstabilniji na pH 11 Cuva se na dva do8
Hinon
ENZIMI
u 20% etoh
čigand se vezuje na pH 7-8
stab(3-10) SAMO i od 2-36 stepeni
ako se kupluje sa malim molekulima hoce da pusti hinon
EEDQ
10% ACETON COOH pH 4 Isoiranje sa 0.1 M hcl ligand u fosfatnom na oh 8 (na vise ce hidrolizovati angidridna) ispiranje na kraju se dobije amidna
NHS
ANTIGENI I ANTITELA COOH Ligand ide pH 6-9 st pola sata stabilno pH (3-12) Čuva se u PBsu na 7.2
Tozil hlorid
U DIOXANU, kao spejser serija izmene do h2o sredine akrivacija na (9-10.5)
HIdrazin
CELULAZE DEKSTRINAZE
Amidna ili estarska, NANO2
pH 7 0 stepeni
ligand u fosf pH 7-9 maks do 37 stepeni
stabilizuje enzime
Amidna veza, tri reakcije
- hidrazin
- Oh- (dobije se karboksilna kise)
- kao hidrszin sa nečim izmedju
- glutaraldehid
p nitrobenzil hlorid
NO2 sa sn i hvl prelazi u NH2
NH2 sa NaNO2 u N2
ligand u para na fenolu
Karbodimid dcc
Videna sredina, 60% prinos, kiselo
Karboksilna do amidne
Nezeljeno: proteini imaju karboksilnu