Chapitre 9 (Régulation et étude de l'expression des gènes durant le développement) Flashcards
Pourquoi se fait la régulation de la transcription?
C’est une réponse à une modification de l’environnement.
Processus de développement de l’organisme
Que permet la différenciation cellulaire?
elle permet à la cellule de devenir hautement spécialisée
qu’est-ce que la morphogenèse?
processus de développement des structures d’un organisme au cours de son embryogenèse (au niveau tissulaire ou des systèmes)
Quelles sont les 4 analyses de mutants possibles pour comprendre la fonction et la spécificité d’un gène?
1- ARN INTERFÉRENT: inhibition de la traduction ou de l’expression d’un gène cible en exprimant un ARN complémentaire à une portion de celui-ci
2- CRE-IOX: Recombinase séquence-spécifique: suppressions, insertions, translocations, inversions
3- INDUCTIBLE À LA TÉTRACYCLINE: la transcription est activée ou désactivée de manière réversible en présence de l’antibiotique tétracycline ou l’un de ses dérivés. utilisation du site TRE devant un promoteur minimal/basal
4- CRISPR-CAS9: Cas9 est une endonucléase d’ADN guidée par ARN. Induit DSB de manière séquence-spécifique. Inactivation du gène ou incorporation d’un gène hétérologue réparation HR. Associé aux séquences CRISPR
Comment peut-on voir la diversité du transcriptome?
À l’aide des banques d’ADN
Qu’est-ce qu’une banque d’ADN?
une banque d’ADN est composée d’une population de vecteurs identiques qui contiennent chacun un insert différent.
Il existe deux types de banques d’ADN, lesquelles?
1- Banques d’ADN génomique (représentation de tout le génome: inclus les introns, exons, promoteurs, ADN répétitifs, ADN intercalaires, pseudogènes)
2- Banques d’ADN complémentaire (permettent de créer une image moléculaire de tous les ARNm exprimés dans un tissus ou à un stade de développement donné)
Comment fonctionne la banque d’ADN génomique?
1- Extraction de l’ADN génomique à partir de n’importe quel tissu
2- Fragmentation de l’ADN en séquences de tailles optimales (à l’aide d’enzymes de restriction, la sonication ou une forte pression pour produire des fragments de tailles variables)
3- Clonage dans un vecteur¨(on choisit les fragments avec les tailles optimales)
4- Séquençage (ajout d’adaptateur aux extrémités des fragments pour assurer des extrémités contantes)
Comment fonctionne la banque d’ADN complémentaire?
1- Extraction de l’ARNm à un moment précis
2- Rétrotranscription en ADN complémentaire
3- Clonage dans un vecteur
4- Séquençage
Que permet le criblage?
Il permet d’identifier et d’isoler les clones d’intérêt contenus dans les banques d’ADN. on sélectionne les clones qui nous intéressent avant de les séquencer
Il existe 3 grande stratégies favorisant la différenciation cellulaire, quelles sont-elles?
1- Localisation d’ARNm selon la polarité de l’œuf ou de l’embryon
2- Contacts entre cellules voisines ou sécrétion “paracrine”
3- Gradients moléculaires dictant des patrons de développement selon la position de la cellule.
Qu’est-ce qu’un gène homéotique?
un gène qui contrôle l’expression d’une panoplie d’autres gènes
Que code Macho-1?
Un activateur de la transcription spécifique (facteurs doigt de zinc) pour des gènes musculaires telles l’actine et la myosine
Comment fonctionne la localisation in situ de l’ARNm?
1- Synthèse et marquage d’ADN simple brin ou d’ARN complémentaires à l’ARNm dont on veut connaître l’expression
2- Hybridation de ces sonde sur des coupes histologiques ou sur des spécimens entiers de petite taille
3- la sonde s’hybride à sa séquence complémentaire
4- révélation du marqueur
Comment une cellule peut-elle influencer l’expression de gènes des cellules voisines?
En produisant des protéines de signalisation extracellulaire.
Ces protéines sont synthétisées dans cette cellule puis elles sont soit déposées dans sa membrane plasmique ou sécrétées dans la matrice extracellulaire.
