Chapitre 8 - Identification bactérienne

Question 1

Quelles sont les deux prémisses pour les méthodes d’identification classiques?

Answer 1

1- mo isolé en culture pure

2- morphologie cellulaire et coloration de Gram doivent être confirmés

Question 2

vrai ou faux: les bactéries peuvent avoir plusieurs empreintes biochimiques

Answer 2

faux

Question 3

En quoi consiste une empreinte digitale biochimique?

Answer 3

croissance sur milieu sélectif, différentiel ou d’enrichissement, propriétés hémolytiques, métaboliques et de fermentation seront toujours les mêmes

Question 4

Vrai ou faux: la majorité du temps, dans un test biochimique, ce n’est pas l’enzyme qui est mise en relief, mais le produit terminal de la réaction.

Answer 4

Vrai

Question 5

Comment fonctionne l’automate VITEK?

Answer 5

Carte comporte 30 puits ayant différents substrats biochimiques déshydratés. elle est fermée hermétiquement après inoculation par le préparateur, puis incubée. un lecteur fait ‘analyse des résultats qui peuvent ensuite être imprimés par l’ordinateur

Question 6

Sur quoi est basé le système Biolog Microbial ID?

Answer 6

réactions d’oxydoréduction

Question 7

Quel logiciel permet l’analyse des AGM?

Quel type d’analyse effectue-t-il?

Answer 7

• Sherlock

- Chromatographie en phase gazeuse

Question 8

Vrai ou faux: la composition des AGM est modelable par le gain/perte d’un plasmide

Answer 8

faux

Question 9

Quel type bactérien n’a pas de peptidoglycane?

Qu’est-ce qui différencie les archées des autres types de bactéries quant à leur paroi?

Answer 9

• mycoplasmes

- les archées n’ont pas de peptidoglycane dans leur paroi

Question 10

Que signifie HPLC?

Cette méthode est utilisée pour quel type d’analyse?

Answer 10

• High performance liquid chromatography (chromatographie liquide à haute performance)
• Caractérisation des acides mycoliques

Question 11

Que sont les acides mycoliques?

Answer 11

Lipides membranaires qui confèrent l’acido-alcoolo-résistance aux mycobactéries.

Question 12

À quoi sert le spectromètre de masse MALDI-TOF

Answer 12

Obtenir des spectres de masse à partir d’une / plz colonies.
spectromètre de masse = identifier molécules en fonction de leur masse

Question 13

Qu’est-ce que la PCR?

Answer 13

technique de réplication ciblée des a.nucléiques in vitro. Permet d’obtenir d’importantes quantités d’un fragments d’ADN spécifique et de longueur définie.
quantité finale de produits directement proportionnelle au nb de cycles réalisés.

Question 14

Pourquoi vouloir caractériser un isolat microbien au-delà de l’espèce et déterminer la sous-espèce / la souche?

Answer 14

• relier un cas individuel à une épidémie
• associer épidémie d’empoisonnement alimentaire et l’aliment qui la cause
• étudier les variations de la pathogénicité
• tracer la source de contaminants
• étudier l’écologie microbienne d’environnements complexes

Question 15

Quels sont les méthodes classiques de typage?

Answer 15

• sérotypage: avant identification, utilisation d’anticorps pour la détection de molécules de surfaces spécifiques aux souches cherchées (antigènes). permet agglutination des cellules voulues
• Phagotypage: phages ont des hôtes très spécifiques et restreints –> comparaison de sensibilité à certains phages entre les souches permet d’établir la parenté

Question 16

Quels sont les types d’antigène de E.coli?

Answer 16

1- somatique (de la paroi): O, 150
2- flagellaires: H, 54
3- de surface/d’enveloppe: K, 80

Question 17

Comment sont obtenus les anticorps polyclonaux et monoclonaux?

Answer 17

polyclonaux: injection d’un antigène cible combiné à un adjuvant à un animal. vérification de la production d’anticorps par échantillons de sang. Ces anticorps ne reconnaissent pas la même portion de l’antigène.

Monoclonaux: sécrétées par cultures cellulaires (hybridomes) produites en fusionnant une cellule productrice d’anticorps (cell B) avec une cellule immortelle. Ne reconnaissent qu’une partie de l’antigène

Question 18

Quels sont les méthodes moléculaires de typage (génotypage) (7)

Answer 18

• électrophorèse en champ pulsé (PFGE) = séparation de fragments d’ADN par une enzyme de restriction. méthode de choix pour pathogènes humains
• Typage génomique multi-locus (MLST) = séquençage de 7 gènes conservés.
• Analyse multi-locus du nb variable de répétitions en tandem (MLVA) = comparaison de séquences répétitives qui peuvent muter rapidement, problèmes de reproductibilité.
• Ribotypage = électrophorèse de fragments d’ADN génomique bactérien codant pour ARNr 16S et 23S
• Amplification PCR = permet empreinte typique des souches et leur comparaison
• Puces à ADN = série de fragments d’ADN fixés sur support solide où dépose solution avec fragment du génome étudié et analyse fragments hybridés.
• Patrons de digestion aux enzymes de restriction (RFLP)= comme PFGE, mais avec méthodes électrophorétiques standards.