Chapitre 3

Question 1

Qu’est-ce la transgénèse?

Answer 1

Introduction d’un gène étranger dans un génome.

Question 2

Quels sont les deux types de sélection clasique?

Answer 2

Croisement et mutagénèse

Question 3

Quelles sont les deux types de modification génétique?

Answer 3

Transgénèse et manipulation

Question 4

Quelles sont les 4 étapes de PCR ?

Answer 4

1. Dénaturation
2. Hybridation
3. Élongation
4. Polymérisation en chaîne

Question 5

De quoi dépend le nombre de produits d’une PCR?

Answer 5

Nombre de cycles, du nombre de molécules initiales d’ADN servant de matrice et de la quantité de réactifs (dNTP, amorces, enzymes).

Question 6

Qu’est-ce qu’on fait pour éviter les effets limitants de la PCR?

Answer 6

On met un excès de réactifs

Question 7

Comment est l’amplification?

Answer 7

Exponentielle

Question 8

Quelles sont les applications de la PCR?

Answer 8

• Détection des polymorphismes (amplifier un gène d’intérêt, visualisation sur électrophorèse)
• Diagnostic d’infections (amplification pour détecter la présence du parasite avec des amorces spécifiques pour des gènes viraux - PCR)
• Diagnostic prénataux (échantillon d’ADN du fœtus)
• Analyse de l’expression de gènes (RT-PCR et qPCR)
• Mutagenèse (amplification, matériel soumis aux agents mutagènes, cloné dans des vecteurs plasmidiques et réintroduit dans un organisme)
• Fabrication de sonde

Question 9

Qu’est-ce qu’un vecteur en biologie moléculaire?

Answer 9

Une molécule circulaire susceptible de recevoir un fragment d’ADN étranger pour ensuite le maintenir dans la cellule hôte.

Question 10

Qu’est-ce que ça signifie si le nombre de cycles nécessaire pour détecter une amplification es trop élevé?

Answer 10

La quantité d’ADN de départ était trop faible

Question 11

D’où viennent naturellement les enzymes de restriction?

Answer 11

Des bactéries parce qu’elles les utilisent pour éliminer l’ADN étranger. Son propre ADN est protégé par la méthylation de ses sites de restriction.

Question 12

Quelle est l’activité des enzymes de restriction?

Answer 12

Endonucléase parce qu’elle est capable de couper des liaisons phosphodiester entre deux nucléotides à l’intérieur d’un acide nucléique.

Question 13

Nommez deux caractéristiques des sites de restriction.

Answer 13

• Composés de 4 à 8 nucléotides
• Palindromes

Question 14

V ou F. Plus les sites de restriction sont courts, plus il y a de chances qu’ils soient présents plusieurs fois dans un génome.

Answer 14

Vrai

Question 15

Quelles sont les deux types de coupure que peuvent faire une enzyme de restriction?

Answer 15

Franche (double brin) ou cohésive (simple brin)

Question 16

Que faut-il faire pour avoir un clonage directionnel?

Answer 16

Utiliser des enzymes différentes à coupure cohésive permettant la ligature au vecteur dans une orientation spécifique.

Question 17

Qu’est-ce qui permet de relier les extrémités libres produites par l’action des enzymes de restriction?

Answer 17

Une ligase

Question 18

Quelles sont les trois régions essentielles d’un vecteur de clonage?

Answer 18

• Une origine de réplication
• Un marqueur de sélection : Gènes de résistance à un antibiotique
• Un site de multiclonage : Insertion des fragments

Question 19

Que se passe-t-il si on utilise deux enzymes de restriction différentes, mais qui produisent des extrémités compatibles?

Answer 19

Le site de restriction ne sera pas reproduit.

Question 20

Comment peut-on reconnaître une mutation dans un site de restriction?

Answer 20

Pour des fragments qui sont censés avoir la même séquence, on n’obtiendra pas le même patron sur le gel d’agarose.

Question 21

Quelles sont les trois possibilités lors de l’action de la ligase?

Answer 21

• Plasmide recombiné (ce qu’on veut)
• ADN non recombiné
• Plasmides non recombinés

Question 22

Expliquez la différence entre les deux grandes catégories de vecteurs.

Answer 22

• Propagation : Répliquer le vecteur en grande quantité dans une bactérie sans le transcrire ou l’exprimer dans la cellule. Origine de réplication à haut rendement.
• D’expression : Possède un promoteur associé à l’insertion qui permet la transcription de l’ADN recombinant. Il répond à la régulation génique, qui est dérivée du génome de l’organisme hôte. On peut ajouter des régions supplémentaire aux ARN et protéines produites qui jouent un rôle de marqueurs.