C8 Flashcards
Que sont les techniques d’ingénierie génétique?
Méthodes et technologies in vitro avec des gènes, des chromosomes ou des cellules entières, afin de construire une nouvelle structure génétique aux propriétés préméditées
A quoi donnent naissance les techniques d’ingénierie génétique?
A des formes de vie complètement nouvelles, aux propriétés génétiques et fonctionnelles préméditées
Où sont réalisées les techniques d’ingénierie génétiques?
En laboratoire et en dehors de l’acte naturel de reproduction
Quelles sont les différentes techniques d’ingénierie génétique?
Technique de l’ADN recombinant
Technique d’hybridation cellulaire
Technique de cybridation cellulaire
Quel est le principe des techniques d’ingénierie génétique?
On part d’une cellule avec de nouvelles structures, qui devient alors capable de se multiplier
Quel principe découvre Griffith?
Le principe transformant: transformation des bactéries non virulentes sous forme pathogène
Qui est le principe transformant?
L’ADN
Quelle technique est utilisée pour mettre en évidence le principe transformant?
ADN recombinant
Comment fonctionne la méthode de l’ADN recombinant?
Ciblage de l’insertion de gènes (passager) dans un vecteur (molécule ADN), gènes coupés avec la même endonucléase de restriction, et l’introduction de ceux-ci (ADN recombinant) dans un environnement cellulaire (hôte) afin de permettre la réplication et l’expression autonomes de ceux-ci.
Que comprend la production d’ADN recombinant?
Extraction ADN (passager)
Faire molécule ADN recombinant (passager+vecteur)
Introduction ADN recombinant dans cellule pour réplication autonome
Quelles sont les différentes synthèses possibles pour réaliser l’extraction de l’ADN?
Synthèse Enzymatique (gène connu)
Synthèse Enzymatique (sur matrice ARNm)
Synthèse Chimique (séquence AA de la protéine est connu)
Quels sont les rôles des nucléases de restriction?
Reconnaissent les séquences nucléotidiques spécifiques dans le brin d’ADN et clivent le squelette phosphate de l’ADN dans un endroit particulier de la séquence de reconnaissance
Quelle est l’origine des nucléases de restriction?
Bactérienne, où elles protègent les bactéries contre les virus en dégradant l’ADN viral
Quels sont les différents types d’endonucléase de restriction?
Qui coupe sur différents sites
Qui coupe au même endroit
Qu’est ce que le vecteur?
Molécule d’ADN qui transfère l’information génétique (le passager) d’une cellule à une autre (plasmides, bactériophages)
Donner des exemples de vecteur.
plasmides
virus
bactéries
cosmides
Quelle est la taille des vecteurs et que cela leur permet il?
Petites molécules qui traversent facilement la membrane cellulaire
Que possèdent les vecteurs qui permet de sélectionner les cellules transformées?
Un gène marqueur
Comment est la réplication des vecteurs?
Automatique rapide
Où le clonage d’ADN recombinant peut il être effectué?
des microbes unicellulaires (E. coli)
des levures
des cellules de mammifères ( cultures de tissus)
Qu’est ce que la transformation?
processus par lequel le plasmide recombinant est introduit dans des cellules bactériennes (E. Coli)
Comment détecter les clones d’E.Coli qui ont été transformés par un plasmide portant le passager?
par l’identification du gène de résistance aux antibiotiques
Quelles sont les bactéries qu’il faut vérifier après transformation?
Celles avec le bon plasmide
Comment est analysé le plasmide des bactéries transformées?
en utilisant une autre digestion de restriction pour voir s’il contient le bon insert dans la bonne orientation
Comment est analysé l’ADN plasmidique des colonies bactériennes?
Les digestions de la restriction, la PCR et le séquençage de l’ADN
Comment sont isolé l’ADN recombinant et son produit synthétisé?
hybridation in situ d’un fragment d’ADN (passager) avec un ADN complémentaire
identification dans le milieu de culture de la protéine contrôlée par le passager
Comment est utilisée la technique de l’ADN recombinant en recherche fondamentale?
découverte exons et introns
cartographie, synthèse des gènes
isolement certains gènes
expression et régulation de la fonction des gènes
effectuer une mutagénèse in vitro
Comment est utilisée la technique de l’ADN recombinant en réalisation pratique?
Synthèse hormone
Vaccin
Diagnostic prénatal
Thérapie génique
Animaux transgéniques
Industrie chimique
Quels sont les produits à base d’ADN recombinant qui sont utilisés en thérapie humaine?
insuline, hormone de croissance, hormone parathyroïdienne, anticorps monoclonaux
En quoi consiste la technique d’hybridation cellulaire?
en une fusion cellulaire: fusion expérimentale de noyaux et de cytoplasme de différentes cellules somatiques pour former une seule cellule hybride
Quelles sont les différentes techniques d’hybridation cellulaire?
Homocaryon: fusion cellulaire homotypique entre des cellules de mêmes types
Syncaryon: hétérocaryon qui sont des cellules mononuclées
Hétérocaryon: fusion de cellules hétérotypiques entre des cellules de types différents
Quelles sont les différentes techniques d’hybridation cellulaire?
Homocaryon: fusion cellulaire homotypique entre des cellules de mêmes types
Syncaryon: hétérocaryon qui sont des cellules mononuclées
Hétérocaryon: fusion de cellules hétérotypiques entre des cellules de types différents
Que font les facteurs inducteurs?
Ils altèrent les propriétés de la membrane cellulaire
Par quoi une fusion cellulaire peut elle être induite?
électriques
polyéthylène glycol
virus
Quelles sont les étapes de réalisation d’une hybridation cellulaire?
Contact entre les cellules
Isolement de cellules hybrides (non sélectif, sélectif)
Quelles sont les cellules qui peuvent fusionner entre elles, quel que soit l’état du cycle cellulaire?
Polycarions
Expliquer la fusion entre cellules en phase S
Cytoplasme des cellules en phase S contient des substances pour initier la réplication de l’ADN
Expliquer la fusion entre cellules en phase G1
Cytoplasme des cellules en phase G1 ne contient pas de facteurs inhibiteurs de réplication
Expliquer la fusion entre cellules en phase G2
Cytoplasme des cellules en phase G2 contient un mécanisme qui bloque tout nouvelle réplication tant que la mitose n’a pas eu lieu
Dans quels contextes utilise t on les cellules hybrides?
étudier l’expression des gènes
étudier les bases de la division cell
étudier la transformation de cell normales en cell malignes
pour la cartographie des chromosomes ou des gènes
Dans la production d’anticorps monoclonal
potentiel biologique : régénération tissulaire et thérapie génique
Qu’est ce q’un hybridome?
lignée cellulaire hybride résultant de la fusion d’un lymphocyte avec une cellule à haute capacité de division
Qu’est ce que la cybridation cellulaire?
fusion entre une cellule somatique normale et une cellule non nucléée (cytoplaste)
Comment est appelé le produit final d’une cybridation cellulaire?
Cybride
Comment utilise t on les cellules cybrides?
cytobiologie
Etudier l’hérédité extranucléaire
Etudier la fonction mitochondriale
étudier les mitochondriopathie
Qu’est ce que Crisper?
courtes séquences palindromiques groupées et régulièrement espacées: développement récent de la technologie de l’ADN recombinant. L’activation, la suppression, l’ajout et la délétion de gènes dans les cellules
Quel est le rôle de Crisper?
Il confère une résistance à l’invasion d’éléments génétiques étrangers (mécanisme de défense utilise l’ARNg)
+ modification du génome
Quel est le principe de la technique Crisper?
introduction dans les cellules/organismes d’une protéine CAS et d’un ARNg complémentaire avec le fragment d’acide nucléique/gène cible
Quel est le rôle des molécules ARNg?
identifier les zones cibles de l’ADN ou de l’ARN
Quel est le rôle des protéines CAS?
activité nucléase qui clive les éléments cibles
Quelles sont les différentes applications biomédicales de la méthode Crisper?
génération de modèles cellulaires/ expérimentaux
comprendre mécanismes moléculaires
applications thérapeutiques
Que sont les cellules IPS?
cellule souche pluripotente induite (iPS production)
Quels sont les applications de la technique IPS?
thérapie de remplacement cellulaire : greffes de cellules iPS ne seraient pas rejetées par le SI du patient
Quels sont les risques de la méthode IPS?
anomalies épigénétiques
anomalies génétiques secondaires à la reprogrammation
Qu’est ce que Holoclar?
le premier médicament de thérapie innovante contenant des cellules souches. Il utilise un type particulier de cellule souche oculaire appelée cellule souche limbique, pour réparer la cornée après une infection pour restaurer la vue.
