Anticorpos Monoclonais Flashcards
Em que ano foi criada a tecnologia do anticorpo monoclonal ?
1975
O que são anticorpos monoclonais ?
São anticorpos sintetizados por uma população de células idênticas (clone) crescidas em um meio de cultura celular. Todos eles reconhecem a mesma parte específica da proteína antigênica que induziu sua formação
Em que consiste a produção dos anticorpos monoclonais ?
Consiste na obtenção de imunoglobulinas secretadas por células híbridas, derivadas de um único clone específico denominado hibridoma, a partir de prévia imunização de camundongos com o antígeno específico
O que é hibridoma ?
É a fusão entre um linfócito B com uma célula mielóide. Assim sendo, um
clone da célula que sofreu a fusão.
Qual substância é usada na etapa de fusão ?
Polietilenoglicol (PEG)
Os anticorpos monoclonais reconhecem UM sítio antigênico do bioquímico injetado.
Essa afirmação é verdadeira ou falsa ?
Verdadeira
Quais são as etapas para a produção de anticorpos monoclonais ?
- Inoculação do antígeno específico
- Remoção do baço do camundongo contendo linfócitos B produtores de Ac (plasmócitos)
- Fusão dos linfócitos B e células tumorais (Mieloma)
- Produção de hibridomas
- Seleção de clones produtores de mAc
Qual o uso dos anticorpos monoclonais ?
- Diagnóstico
- Terapia
- Imunosupressão
- Imunoprofilaxia
- Tipificação de Leucemias e Linfomas
- Purificação de material biológico
Quais os tipos de inoculação ?
Inoculação via subcutâneo (SC)
Inoculação via intraperitoneal (IP)
Inoculação via intravenosa (IV)
Qual a substância indutora de mieloma ?
Pristane
As células tumurais (mieloma) são deficientes na produção da enzima HGPRT (enzima envolvida na produção de purinas e pirimidinas).
Essa afirmação é verdadeira ou falsa ?
Verdadeira
As células tumurais (mieloma) possuem sensibilidade ao meio devido a presença de quais substâncias ?
Hipoxantina, Aminopterina e Timidina (HAT)
Sobre a preparação de cultura de macrófagos peritonais responda: o que são e para que serve ?
São células preparadas de 1-2 dias antes da fusão e tem como função alimentar o suporte da cultura de hibridoma. Elas realizam:
1. Remoção de debris (vestígios) celulares
2. Desintoxicar o meio
3. Fornece fatores de crescimento
Quais são as etapas da fusão ?
- Coleta do baço linfócito B (plasmócitos)
- Mistura dos plasmócitos com células de mieloma
- Adição de Polietilenoglicol (PEG)
- Produção de células híbridas e não híbridas
Qual enzima e quais proteínas as células de mieloma utilizadas na produção de anticorpos monoclonais, não expressam ?
Não expressam a enzima HGPRT e nem imunoglobulinas
As células de mieloma fornecem as enzimas necessárias para o crescimento num meio seletivo e os linfócitos B cedem propriedades de crescimento imortal.
Essa afirmação é verdadeira ou falsa ?
Falsa. São os linfócitos B quem fornecem as enzimas necessárias para o crescimento num meio seletivo e as células de mieloma quem cedem as propriedades de crescimento imortal
Todas as células de mieloma que não consigam fundir e as que fundem com outras células de mieloma não vão crescer no meio seletivo, devido a ausência de qual enzima ?
A enzima: HGPRT
(Hipoxantina fosforribosil transferase)
Como é feito a obtenção do hibridoma ?
É feita através da fusão do linfócito B, proveniente do baço do ratinho de laboratório e previamente imunizado com o antigeno alvo, com uma célula de mieloma, selecionada pela ausência da produção ou secreção de anticorpos e falta da enzima HGPRT
Qual a função da aminopterina ?
Bloquear a principal via de síntese das purinas e pirimidinas
Qual a função da hipoxantina e timidina ?
Podem ser utilizadas para a produção de nucleotídeos na presença da enzima HGPRT
(Hipoxantina fosforil transferase)
Com relação a expansão temos:
- Em camundongo (concentração maior 5mg/ml mAb)
- Em in vitro concentração menor 10ug/ml mAb)
Essa afirmação é verdadeira ou falsa ?
Verdadeira. Em camundongos a concentração precisa ser maior.
E em in vitro menor (Material in vitro é menos concentração e contém soro bovino)
O que é ascite ?
É o acúmulo de líquido na cavidade peritoneal, rico em anticorpo monoclonal
O que é Cromatografia de afinidade ?
É um método utilizado para purificação de macromoléculas. As misturas bioquímicas tem naturalmente diferenças estruturais que favorecem uma interação altamente específica entre antígeno e anticorpo, enzima e substrato, ou receptor e ligante.
É o método mais específico (quando a quantidade de ligante ou
antígeno não é limitante)
O que faz a precipitação diferencial com sulfato de Amônio ?
Separa o anticorpo de albumina e outras proteínas encontradas do meio de cultura ou soro
Quais os principais métodos utilizados no diagnósticos com anticorpos monoclonais
- IFA (imunofluorescência) marcados com fluoróforos FLUORESCÊNCIA (Adição de um “anticorpo secundário”
São bons e muito rápidos) - IPX - enzima peroxidase COLORIMÉTRICO (imunoperoxidase) mudar a cor
- ELISA (imunoenzimático) a solução mudar de cor - laranja, vermelho, azul.
COLORIMÉTRICO(Detectar tanto a presença de antígeno (já teve contato com patógeno), como de anticorpo. Teste de antígeno e teste de antisoro) - RIP (radioimunoensaio) RADIOATIVIDADE
- WB (Western Blot) COLORIMÉTRICO
Como é feita a purificação de material biológico ?
- Através da cromatografia de afinidade
- Identificação de leucócitos
- Determinação de linhagens linfocitárias
- Enzimas, hormônios, receptores celulares
